基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-04-28; 16(12): 1281-1286
Published online 2008-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i12.1281
肝细胞生成素205与细胞色素C的相互作用
储著朗, 王建, 杨永升, 唐刘君, 陈慧, 杨晓明, 汪思应
储著朗, 汪思应, 安徽医科大学病理生理学教研室 安徽省合肥市 230032
储著朗, 王建, 杨永升, 唐刘君, 陈慧, 杨晓明, 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 北京蛋白质组研究中心 蛋白质组学国家重点实验室 北京市 100850
储著朗, 2005级安徽医科大学病理生理硕士, 主要从事蛋白质相互作用研究.
基金项目: 安徽省2006研究实验基地科研带头人培养专项基金资助项目; 国家自然科学创新群体基金资助项目, No. 30621063; 国家高新技术研究发展计划(863计划)资助项目, No. 2006AA02A310; 国家重点基础研究发展规划(973计划)资助项目, No. 2006CB910802; 安徽省人才开发基金资助项目, No. 2002Z035.
作者贡献分布: 储著朗和王建对此文所作贡献均等; 本课题设计由储著朗, 王建, 杨晓明及汪思应完成; 研究过程由储著朗, 杨永升, 唐刘君及陈慧共同完成; 本论文写作由储著朗完成.
通讯作者: 汪思应, 230032, 安徽省合肥市梅山路69号, 安徽医科大学病理生理教研室. sywang@ahmu.edu.cn
电话: 0551-5167706传真: 0551-5167706
收稿日期: 2008-01-09
修回日期: 2008-03-18
接受日期: 2008-04-21
在线出版日期: 2008-04-28
Abstract

目的: 应用酵母双杂交(yeast two hybrid, Y2H)和GST-Pull down技术鉴定肝细胞生成素205(hepatopoietin 205, HPO205)与细胞色素C(cytochrome c, Cytc)间的相互作用.

方法: 采用PCR技术扩增HPO205和Cytc编码基因, 分别将其构建Y2H质粒pDBLeu和pPC86的重组载体. 应用Y2H技术将二者的重组质粒共转染酵母MaV203进行鉴定, 同时用GST-Pull down方法对其验证.

结果: 成功克隆HPO205和Cytc编码基因至Y2H载体和相应表达载体, 包括pDBLeu-GRER、pDBLeu-CYCS、pPC86-GRER、pPC86-CYCS. 经过Y2H鉴定发现, pDBLeu-GRER+pPC86-CYCS共转后能激活Ura和His两个报告基因, 而pDBLeu-CYCS+pPC86-GRER共转则不能激活任何一个报告基因. GST-Pull down实验显示, GST-CYCS能将HPO205沉淀下来，而GST空蛋白不能沉淀HPO205, 证实HPO205与Cytc存在相互作用.

结论: HPO205可能通过Cytc参与电子传递或/和细胞凋亡过程.

Keywords: 肝细胞生成素205; 细胞色素C; 蛋白质相互作用; 酵母双杂交; GST-Pull down技术