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世界华人消化杂志. 2008-04-28; 16(12): 1260-1265
Published online 2008-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i12.1260
Published online 2008-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i12.1260
幽门螺杆菌与胃上皮细胞不同作用时间点蛋白质组的差异分析
宋衍燕, 赵飞, 肖迪, 马广源, 孟凡亮, 何丽华, 张建中, 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 北京市 102206
宋衍燕, 在读博士, 主要从事幽门螺杆菌与胃黏膜上皮细胞相互作用表达谱芯片与蛋白质组学的研究.
作者贡献分布: 本研究由宋衍燕及张建中设计; 研究过程由宋衍燕, 马广源, 孟凡亮及何丽华完成; 蛋白质谱鉴定由宋衍燕及肖迪完成; 数据分析由宋衍燕及赵飞完成; 本论文写作由宋衍燕及张建中完成.
通讯作者: 张建中, 102206, 北京市, 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所. helico99@sina.com
电话: 010-61739456传真: 010-61730233
收稿日期: 2008-03-12
修回日期: 2008-04-08
接受日期: 2008-04-21
在线出版日期: 2008-04-28
修回日期: 2008-04-08
接受日期: 2008-04-21
在线出版日期: 2008-04-28
Abstract
目的: 分析幽门螺杆菌(H. pylori)与人胃腺癌上皮细胞(human gastric adenocarcinoma epithelial, AGS)的相互作用蛋白质组学差异.
方法: 采用双向凝胶电泳分离H. pylori 26695株与AGS细胞相互作用0.5、2、4 h时间点的细胞和黏附菌的全蛋白样品, 考马斯亮兰染色, ImageMster 2D图像分析软件比较分析, 识别差异蛋白, 将差异蛋白点进行胶内酶解, 经基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)获得肽质量指纹图谱(PMF), 通过搜寻蛋白质数据库完成对差异蛋白的鉴定.
结果: 对0.5、2、4 h时间点图谱差异蛋白点分析共发现主要差异蛋白点66个, 对其中34个(共对应16种蛋白)最终完成准确鉴定, 2 h后8种蛋白开始上调, 其中2种是细胞来源, 6种H. pylori来源; 4 h时4种细胞来源蛋白下调, 并有4种新的蛋白开始被观察到. 在共感染的早期, 细胞的琥珀酸脱氢酶、H. pylori的抗氧化酶类、黏附素以及HSP 60表达上调. 感染晚期主要是细胞来源的亲环素A、新生多肽相关复合物α多肽开始表达, H. pylori来源的尿素酶、非血红素铁蛋白等蛋白明显出现在黏附菌成分中.
结论: H. pylori与AGS细胞相互作用过程中, 细菌和细胞蛋白表达均存在明显时序性变化, 早期相互作用则主要表现为以与黏附等有关的蛋白表达变化, 后期向有利细菌存活和增殖的方向发展, 并呈现出与免疫逃逸和病理损伤相关的变化.
Keywords: 幽门螺杆菌; 人胃腺癌上皮细胞; 共培养; 蛋白质组