基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-04-08; 16(10): 1064-1068
Published online 2008-04-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i10.1064
人α1, 3-岩藻糖基转移酶IV荧光真核表达载体的构建及鉴定
杨雪松, 贾爽, 张震波, 燕秋
杨雪松, 贾爽, 张震波, 燕秋, 大连医科大学生化与分子生物学教研室 辽宁省大连市 116044
杨雪松, 2007年大连医科大学生物化学与分子生物学博士, 讲师, 主要从事糖生物学与生殖的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30270329, No. 30670465, No. 30672753.
作者贡献分布: 课题由杨雪松, 燕秋设计; 研究过程由杨雪松, 贾爽及张震波操作完成; 数据分析由杨雪松, 张震波完成; 本论文写作由杨雪松完成.
通讯作者: 燕秋, 116004, 辽宁省大连市旅顺南路西段9号, 大连医科大学生物化学教研室. yanqiu2083@126.com
电话: 0411-86110308
收稿日期: 2007-11-15
修回日期: 2008-02-29
接受日期: 2008-03-28
在线出版日期: 2008-04-08
Abstract

目的: 构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pEGFP-N1-FUT4真核表达载体.

方法: 采用RT-PCR方法获得α1, 3-岩藻糖基转移酶IV(FUT4)全长基因, 克隆至pEGFP-N1-FUT4表达载体并进行鉴定. 通过脂质体转染到人表皮癌细胞系A431中, 荧光显微镜下观察并经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测FUT4的表达.

结果: 测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT4基因, FUT4基因正确插入pEGFP-N1中, 在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白在A431细胞中的表达, RT-PCR和Western blot检测结果显示FUT4的表达明显增加.

结论: 成功构建绿色荧光蛋白为报告基因的FUT4 真核表达载体, 并检测到在A431细胞中的表达.

Keywords: α1, 3-岩藻糖基转移酶Ⅳ; 绿色荧光蛋白; 基因克隆; 基因表达; 逆转录-聚合酶链反应