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hFXYD6反义核酸对胆管癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响
窦春青, 周宁新, 中国人民解放军总医院全军肝胆外科研究所 北京市 100853
岳鑫, 北京大学神经科学研究所 北京市 100083
窦春青, 博士, 主治医师, 主要从事胆道生理病理及胆管癌基因诊断治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30471699.
通讯作者: 周宁新, 100853, 北京市, 北京市解放军总医院全军肝胆外科研究所. zhounx301@163.com
收稿日期: 2006-12-25
修回日期: 2007-01-04
接受日期: 2007-01-20
在线出版日期: 2007-03-28
修回日期: 2007-01-04
接受日期: 2007-01-20
在线出版日期: 2007-03-28
Abstract
目的: 研究hFXYD6基因反义核酸对人胆管癌QBC939细胞体外增殖和侵袭能力的影响.
方法: 构建hFXYD6基因反义核酸真核表达载体pcDNA3.1(-)/hFXYD6(-)并转染人胆管癌QBC939细胞, 同时设pcDNA3.1(-)空载体对照组和空白对照组. SYBR Green I荧光定量RT-PCR和免疫组化分别检测hFXYD6 mRNA及蛋白表达; MTT、平板克隆形成实验检测细胞体外增殖活性; 流式细胞仪检测细胞周期; Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭能力.
结果: 与空白组和空载组比较, 反义组细胞hFXYD6 mRNA及蛋白表达量降低; 细胞群体倍增时间增加(46.8 h vs 34.5 h, 35.3 h), 细胞克隆形成率降低(24.3%±5.3% vs 61.0%±8.5%, 58.0%±5.6%, P<0.001); 细胞周期中G1期细胞比例明显升高(66.4%±2.9% vs 33.5%±2.3%, 39.4%±3.7%, P<0.001), S期比例明显减少(18.6%±1.6% vs 36.2%±2.1%, 34.1%±1.6%, P<0.001); Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数无显著改变. 空白组和空载组细胞间均无明显差异.
结论: hFXYD6反义核酸抑制人胆管癌QBC939细胞体外增殖能力, 但对其侵袭能力无明显作用.
Keywords: FXYD6; 反义核酸; 胆管癌; 增殖; 侵袭; 荧光定量RT-PCR; 免疫组化; 流式细胞术