基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-03-18; 15(8): 824-830
Published online 2007-03-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i8.824
血管生成素-1基因对人胃癌细胞增殖与凋亡的影响
颜芳, 欧希龙, 关云艳, 产松苗, 陈国胜, 杨柳, 孙为豪
颜芳, 欧希龙, 关云艳, 杨柳, 东南大学临床医学院附属中大医院消化科 江苏省南京市 210009
陈国胜, 孙为豪, 南京医科大学第一附属医院老年医学科 江苏省南京市 210029
产松苗, 上海市梅山医院消化内科 江苏省南京市 210039
颜芳, 医学学士, 在读硕士研究生, 主要从事消化系统肿瘤的研究.
通讯作者: 欧希龙, 210009, 江苏省南京市, 东南大学医学院附属中大医院消化科. ouxilong@126.com
电话: 025-83272034
收稿日期: 2006-12-14
修回日期: 2007-01-03
接受日期: 2007-01-10
在线出版日期: 2007-03-18
Abstract

目的: 探讨人血管生成素-1(angiopoietin-1, Ang1)对胃癌细胞MGC-803增殖与凋亡的影响, 研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制.

方法: 以人胚肾293细胞对重组质粒Ad-Ang1和Ad-GFP进行包装、扩增和纯化后转导MGC-803细胞, 应用MTT比色法分析Ang1对该胃癌细胞增殖的影响, 通过流式细胞仪分析血浆Ang1对胃癌细胞凋亡的影响, 并通过免疫组织化学法检测Ang1及其受体Tie-2的表达情况.

结果: 成功包装、扩增及纯化了重组腺病毒Ad-Ang1及对照病毒Ad-GFP, 其感染滴度分别为2.0×1012和1.15×1013 PFU/L. 当感染复数(MOI)为20时转导率即接近100%, 而细胞形态无明显改变. MTT结果显示, 24, 48和72 h时Ad-Ang1组吸光度均明显高于Ad-GFP组及对照组(Ad-GFP vs Ad-Ang1: 24 h, t = 16.32, P<0.0001; 48 h, t = 10.47, P = 0.0005; 72 h, t = 24.59, P<0.0001. 对照组 vs Ad-Ang1: 24 h, t = 10.54, P = 0.0005; 48 h, t = 13.92, P = 0.0002; 72 h, t = 22.46, P<0.0001), Ad-GFP组与对照组相比无差别; 流式细胞仪检测显示, 对照组、Ad-GFP组和Ad-Ang1组的凋亡率(%)分别为: 9.90±0.62, 10.07±1.27和4.17±0.35; 免疫组化显示, 3组细胞均有不同程度Ang-1及其受体Tie-2的表达, 且其阳性表达率在Ang1基因转染组(Ang-1: 99.2±0.8; Tie-2: 85.4±1.8)显著高于对照组(Ang-1: 51.0±2.7; Tie-2: 30.8±1.5)和GFP组(Ang-1: 51.4±1.5; Tie-2: 32.4±2.3)(P<0.0001).

结论: Ang1能显著促进人胃癌细胞MGC-803体外增殖, 抑制血浆饥饿时的凋亡.

Keywords: 腺病毒载体; 血管生成素; 胃癌; 增殖; 凋亡