基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-03-18; 15(8): 800-806
Published online 2007-03-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i8.800
双齿围沙蚕蛋白酶的纯化及其性质
汪靖超, 赵峰, 李荣贵, 王斌
汪靖超, 赵峰, 李荣贵, 青岛大学医学院生物系 山东省青岛市 266071
王斌, 青岛大学医学院微生物学教研室 山东省青岛市 266021
汪靖超, 硕士, 讲师, 主要从事分子生物学研究.
基金项目: 国家重点基础研究前期专项基金资助项目, No. 2004CCA02400.
通讯作者: 汪靖超, 266071, 山东省青岛市, 青岛大学医学院生物系. wangjc@qdu.edu.cn
电话: 0532-85953710
收稿日期: 2006-11-10
修回日期: 2007-01-03
接受日期: 2007-01-10
在线出版日期: 2007-03-18
Abstract

目的: 纯化双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis Grube)蛋白酶, 并对其性质进行研究.

方法: 将沙蚕匀浆液先后进行Superdex-75凝胶柱层析、MonoQTM阴离子交换柱层析及SP-Sepharose 4B阳离子交换层析进行纯化. 将经过非还原性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的蛋白酶电转移至含明胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶中, 通过观察明胶的分解来确定电泳条带的蛋白酶活性. 对纯化后蛋白酶的最适pH值, 热稳定性, 最适温度, 蛋白酶抑制剂的影响, 有机溶剂的稳定性, 金属离子对酶活性的影响等性质进行了测定.

结果: 纯化后得到的一种蛋白酶, 还原性SDS-PAGE显示纯化的蛋白酶为两条带, 分子量分别为Mr 34900和Mr 33900, 而非还原性SDS-PAGE出现了分子量分别为Mr 65600、Mr 57900、Mr 43500的三条蛋白带, 明胶蛋白酶活性图谱检测显示酶活性主要在约Mr 66000处. 该蛋白酶具较好的热稳定性, 在pH 8-10和20-35 ℃的情况下有较高活性. PMSF对该酶有较强抑制作用, 而有机溶剂对该酶没有明显的影响.

结论: 该蛋白酶由两个通过二硫键连接在一起的亚基构成, 两亚基的分子量分别为Mr 33900和Mr 34900; 本文所采用的新的明胶蛋白酶活性图谱检测法是一种非常灵敏和有效的蛋白酶活性检测方法.

Keywords: 纯化; 蛋白酶; 纯化双齿围沙蚕; 性质