基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-03-08; 15(7): 677-682
Published online 2007-03-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i7.677
培养的小鼠小肠和胃Cajal间质细胞起搏电流的特性
朴莲花, 张扬, 黄旭, 李春晖, 高玲, 许文燮
朴莲花, 张扬, 黄旭, 高玲, 许文燮, 上海交通大学医学院生理学教研室 上海市 200240
朴莲花, 李春晖, 延边大学医学院生理学教研室 吉林省延吉市 133000
朴莲花, 2003级生理学专业硕士生, 主要从事消化道平滑肌动力学研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30160028, No. 30360031.
通讯作者: 许文燮, 200240, 上海市东川路800号, 上海交通大学文选医学楼328室. wenxiexu@sjtu.edu.cn
电话: 021-34205639
收稿日期: 2006-08-24
修回日期: 2006-08-30
接受日期: 2006-09-20
在线出版日期: 2007-03-08
Abstract

目的: 探讨培养的小鼠小肠和胃Cajal间质细胞(ICC)起搏电流的特性.

方法: 用二型胶原酶分离ICC并在含有干细胞因子的培养液中培养, 72 h后通过免疫组织化学方法进行鉴定. 利用传统全细胞模式膜片钳技术记录胃窦和小肠ICC的起搏电流. 把电极内液的钙螯合剂EGTA浓度由0.1 mmol/L增加到10 mmol/L, 使游离钙浓度降低, 观察细胞内低钙对起搏电流的影响.

结果: 培养72 h 后的ICC在光镜下表现出自胞体发出2-4条长突起, 并与邻近ICC突起相互连接成网络状; 激光共聚焦显微镜下观察到ICC表面酪氨酸激酶受体c-kit表达呈阳性; 膜电位钳制在-60 mV的条件下, ICC上可以记录到自发而节律性内向电流, 即起搏电流. 在胃和小肠ICC之间以及单个ICC和ICC网络之间, 电流幅度、频率有差异. 在传统的全细胞膜片钳模式下, 通过增加电极内液中EGTA浓度使细胞内游离钙降低时, 可以激活ICC的内向电流; 在细胞外给予钙调蛋白抑制剂W-7时, 可以激活ICC内向电流的同时明显增加起搏电流的幅度.

结论: 小鼠胃和小肠ICC产生的起搏电流频率与小鼠胃和小肠自律运动的频率非常接近; 网络ICC产生的起搏电流比单个ICC稳定、幅度高、频率快; ICC内游离钙浓度的降低是产生起搏电流的重要因素; 钙调蛋白在ICC内参与起搏电流的抑制性调节.

Keywords: Cajal间质细胞; 起搏电流; 钙调蛋白; 胞内钙