研究快报
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世界华人消化杂志. 2007-02-18; 15(5): 500-504
Published online 2007-02-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i5.500
结肠癌羟基喜树碱耐药细胞SW1116/HCPT酵母双杂交cDNA文库的构建和鉴定
靳西凤, 冉志华, 陈翔, 萧树东
靳西凤, 冉志华, 陈翔, 萧树东, 上海交通大学医学院附属仁济医院, 上海市消化疾病研究所 上海市 200001
基金项目: 国家自然科学基金项目, No. 30670942; 上海市科委重点实验室项目, No. 06DZ22027.
通讯作者: 冉志华, 200001, 上海市, 上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科, 上海市消化疾病研究所. violetmoodee1210@126.com
电话: 021－63260930
收稿日期: 2006-10-31
修回日期: 2006-11-01
接受日期: 2006-11-28
在线出版日期: 2007-02-18
Abstract

目的: 构建羟基喜树碱耐药结肠癌细胞株SW1116/HCPT细胞的酵母双杂交cDNA文库.

方法: 用TRIzol从SW1116/HCPT细胞提取总RNA, 采用CLONTECH SMART (switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术和同源重组(homologous recombination)的方法构建SW1116/HCPT细胞的cDNA文库.

结果: 提取的RNA的A260/A280为1.98, 甲醛变性琼脂糖凝胶电泳示出28S rRNA、18S rRNA及5S rRNA 3条特异性带, 28S与18S带浓度及亮度比值约为2. 文库ds cDNA smear较长分布在0.1-5 kb, 成长瀑布条带, 而且在接近1 kb的区域有密集的带子, 为高丰度表达基因. 依据生长菌落计数, 共获得(1.2-1.9)×106个转化子, 重组率达93.7%, 文库插入片段大小为0.2-5 kb.

结论: 成功构建了SW1116/HCPT cDNA文库.

Keywords: 酵母细胞; SMART技术; 酵母双杂交cDNA文库; 同源重组