基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-02-18; 15(5): 471-475
Published online 2007-02-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i5.471
幽门螺杆菌重组中性粒细胞激活蛋白蛋黄抗体的制备
邓颖, 杨致邦, 黄伟, 林珊珊, 黄进, 叶翠莲
邓颖, 杨致邦, 林珊珊, 黄进, 叶翠莲, 重庆医科大学微生物学与免疫学教研究室 重庆市 400016
黄伟, 西南大学蚕学与生物技术学院生物技术系 重庆市 402460
邓颖, 重庆医科大学硕士, 主要从事临床消化内科及幽门螺杆菌的研究.
通讯作者: 杨致邦, 400016, 重庆市, 重庆医科大学微生物学与免疫学教研究室. dryangfm365@sina.com
电话: 023-68485193
收稿日期: 2006-01-09
修回日期: 2006-01-01
接受日期: 2006-01-25
在线出版日期: 2007-02-18
Abstract

目的: 制备高效价的抗Nap蛋黄抗体(IgY).

方法: 大量诱导、培养重组菌pQE30-NapA-DH5α获得重组蛋白Nap, 经Ni2+-NTA树脂纯化后, Bradford法测定蛋白浓度. 用纯化的Nap蛋白免疫鸡, 水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY. ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化. 将效价高的Nap-IgY用硫酸铵沉淀法纯化浓缩, 间接ELISA法检测效价, Bradford法测定蛋白含量. Western blot检测制备的Nap-IgY的抗体活性.

结果: Nap重组蛋白主要以包涵体形式表达, 蛋白含量为0.37 g/L. 免疫鸡的蛋黄提取物可与Nap发生特异性反应, IgY效价随免疫时间增加而升高, 在110 d达最高效价. 经纯化浓缩后, Nap-IgY的效价为1:12800, 蛋白浓度为23.67 g/L.

结论: 成功制备了高浓度、高效价的Nap特异性IgY.

Keywords: 幽门螺杆菌; 重组蛋白; 中性粒细胞激活蛋白; 蛋黄抗体