基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-02-18; 15(5): 447-452
Published online 2007-02-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i5.447
小干扰RNA抑制胃癌细胞株葡萄糖调节蛋白Grp78的表达
张新晨, 杨维良, 徐华锋, 吴德全, 杨宝峰
张新晨, 杨维良, 吴德全, 哈尔滨医科大学附属第二医院普通外科 黑龙江省哈尔滨市 150086
徐华锋, 黑龙江大学生命科学院 黑龙江省哈尔滨市 150080
杨宝峰, 哈尔滨医科大学药理学教研室 150080
张新晨, 副主任医师, 医学博士, 博士后, 主要从事普通外科、肿瘤基因治疗方面研究.
基金项目: 黑龙江省自然科学基金资助项目, No. D2004-23.
通讯作者: 杨宝峰, 150080, 黑龙江省哈尔滨市, 哈尔滨医科大学药理学教研室. yangbf@ems.hrbmu.edu.cn
电话: 0451-86605356
收稿日期: 2006-10-31
修回日期: 2006-12-01
接受日期: 2006-12-14
在线出版日期: 2007-02-18
Abstract

目的: 观察Grp78靶向RNA干扰质粒载体对人类胃癌细胞株7901 Grp78基因表达的抑制作用.

方法: 设计1对Grp78基因发卡寡核苷酸, 并与psiSTRIKETM质粒载体连接, 构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体, 将重组质粒导入人类胃癌细胞株7901内, 分别在转染前、转染后24, 48和72 h通过RT-PCR、免疫荧光技术检测Grp78 mRNA及蛋白水平的表达情况.

结果: 成功构建RNA干扰质粒载体, 靶向Grp78干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp78. 将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后, 观察到Grp78 mRNA及蛋白水平的表达明显下调, 随着时间的延长Grp78在实验组中的表达逐渐降低, 并随着时间推移稳定存在. 阴性对照组, 转染前组, 转染12, 48, 72 h组Grp78的mRNA相对表达量分别为1.069, 0.972, 0.662, 0.408, 0.420. 转染后组较转染前组及阴性对照组分别具有显著性差异(P<0.01), 转染前与阴性对照组无显著性差异(P>0.05). 转染前后组免疫荧光表达结果统计学差异明显(P<0.001), 其中转染后48 h同转染后24 h相比较Grp78蛋白表达明显减少(P<0.00714).

结论: 构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp78能明显抑制Grp78 mRNA及蛋白的表达.

Keywords: 胃癌; RNA干扰; 葡萄糖调节蛋白; 逆转录-聚合酶链反应; 免疫荧光技术