修回日期: 2006-11-01
接受日期: 2006-11-28
在线出版日期: 2007-02-08
目的: 通过单独及联合应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861处理胃癌细胞系AGS, 比较各实验组的增殖凋亡率, 探讨联合抑制COX-2和5-LOX两条通路对胃癌细胞系AGS增殖凋亡的影响.
方法: AGS细胞在含100 mL/L小牛血清+100 kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中培养, 取对数生长期细胞做为实验组. 以相差显微镜观察药物处理前后的细胞形态改变; 设立AA861(25, 50, 100 μmol/L)组, 尼美舒利(50, 100, 200 μmol/L)组, 及AA861联合尼美舒利处理组(50 μmol/L AA861+100 μmol/L尼美舒利), 用四氮唑蓝(MTT)法在24, 48, 72 h测量细胞吸光度, 以此检测单用及联用AA861与尼美舒利对细胞生长增殖的影响; 实验通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡率, 以DNA-LADDER法观察凋亡.
结果: 相差显微镜观察, 药物处理组细胞与对照组相比, 形态发生明显改变. MTT显示, 除尼美舒利200 μmol/L的24, 48 h处理组及AA861 25 μmol/L的24 h处理组外, 尼美舒利和AA861基本呈时间、剂量依赖性抑制AGS细胞增殖. TUNEL染色法表明, 尼美舒利或AA861处理组的细胞凋亡率随着剂量的增加而升高. 药物处理48 h后, MTT法表明, 细胞增殖在AA861组和尼美舒利组与两药联用组间相比差异显著(0.240±0.002 vs 0.207±0.001, P<0.01; 0.211±0.002 vs 0.207±0.001, P<0.05); TUNEL染色法表明, 单药组与两药联用组细胞凋亡率相比差异明显(AA861组: 18.67%±0.03%, 尼美舒利组: 20.94%±0.48% vs 两药联用组: 23.76%±0.92%, P<0.01); AO/EB染色法也同时表明, 细胞凋亡单药组与两药联用组相比差异明显(AA861组: 18.17%±0.28%、尼美舒利组: 19.35%±0.74% vs 两药联用组: 23.78%±0.04%, P<0.01). DNA琼脂糖凝胶电泳法显示, 两药联合处理AGS细胞组与单药处理组比较, 癌细胞增殖被抑制, 凋亡明显增加.
结论: COX-2抑制剂尼美舒利和5-LOX抑制剂AA861对胃癌AGS细胞的增殖抑制以及促凋亡作用基本呈时间浓度依赖性. 联用尼美舒利和AA861抑制COX-2与5-LOX两条通路, 与单独抑制其中一条通路比较, 能更有效抑制胃癌细胞增殖, 促进凋亡.