基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-12-18; 15(35): 3715-3721
Published online 2007-12-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i35.3715
DNA聚合酶γ的提取、纯化和鉴定
张颖慧, 林菊生, 李岩, 高琳琳, 王晓燕
张颖慧, 林菊生, 李岩, 高琳琳, 王晓燕, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所 湖北省武汉市 430030
张颖慧, 2005年华中科技大学同济医学院硕士, 主要从事肝脏病学研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30330680.
通讯作者: 林菊生, 430030, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所. linjusheng2001@163.com
电话: 027-83662578
收稿日期: 2007-09-17
修回日期: 2007-11-06
接受日期: 2007-11-11
在线出版日期: 2007-12-18
Abstract

目的: 提取并纯化人宫颈癌细胞(HeLa)的线粒体DNA聚合酶γ(DNA polymerase γ, Pol γ), 鉴定其纯度和活性. 

方法: 运用离子交换层析等方法提取纯化HeLa细胞的线粒体Pol γ, 并用Bradford法检测蛋白浓度. 经SDS-PAGE检测蛋白纯度和相对分子量, Western blotting验证蛋白. 用α-32P-dTTP掺入法, 液体闪烁计数器进行放射性测量以确定Pol γ的活性. 

结果: 成功提取并纯化HeLa细胞的线粒体Pol γ, 经SDS-PAGE鉴定, 有一个大约140 kDa的亚基单位, Western blotting证实为Pol γ. 对其进行150倍纯化, 收得率为6%, 酶的总活力为4.81 U, 比活力为36.17 U/mg.

结论: HeLa细胞的线粒体Pol γ通过离子交换层析法提取和纯化后活性较高, 可用于体外药物线粒体毒性的检测.

Keywords: 人宫颈癌细胞; DNA聚合酶γ; 线粒体; 离子交换层析