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世界华人消化杂志. 2007-10-18; 15(29): 3067-3073
Published online 2007-10-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i29.3067
Published online 2007-10-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i29.3067
下调XIAP表达增强化疗药物诱导胃癌细胞凋亡的作用
郑丽端, 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科 湖北省武汉市 430022
童强松, 汪良, 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科 湖北省武汉市 430022
董继华, 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室 湖北省武汉市 430022
侯晓华, 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科 湖北省武汉市 430022
郑丽端, 2005年华中科技大学同济医学院博士研究生, 主治医师, 主要从事消化系统疾病的分子病理研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30600278; 教育部新世纪优秀人才支持计划资助项目, No. NCET- 06-0641.
通讯作者: 童强松, 430022, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科. qs_tong@hotmail.com
电话: 027-85726129
收稿日期: 2007-05-28
修回日期: 2007-09-27
接受日期: 2007-09-28
在线出版日期: 2007-10-18
修回日期: 2007-09-27
接受日期: 2007-09-28
在线出版日期: 2007-10-18
Abstract
目的: 观察下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因表达对胃癌细胞化疗敏感性的影响.
方法: 构建XIAP基因反义真核表达载体, 稳定转染胃癌细胞株MKN-45, RT-PCR和Western blot法检测癌细胞XIAP基因表达. 选用顺铂、丝裂霉素分别处理转染前后的胃癌细胞, 采用MTT比色法、克隆形成抑制实验检测癌细胞体外生长活性; 透射电镜、流式细胞术、TUNEL检测癌细胞凋亡及比率; Western blot和比色法检测细胞内caspase-3蛋白表达和活性水平.
结果: RT-PCR和Western blot证实, 稳定转染反义XIAP基因的胃癌细胞MKN-45的XIAP mRNA和蛋白表达水平分别降低84.75%(P<0.01)和89.75%(P<0.01). 各浓度顺铂、丝裂霉素处理24 h后, 转染反义XIAP基因的MKN-45细胞生长抑制率分别增加7.3%-25.3%(P<0.01), 12.3%-16.3%(P<0.01). 透射电镜下可见部分细胞发生典型的凋亡形态学改变, 凋亡率分别为34.12%和32.5%, 显著高于未转染对照组MKN-45细胞的凋亡率(14.2%, P<0.05). 与MKN-45细胞比较, 稳定转染反义XIAP基因的MKN-45细胞内caspase-3表达水平增高2.45倍(P<0.01), 活性水平提高3.68倍(P<0.01).
结论: 通过反义RNA技术下调XIAP基因表达, 能提高癌细胞中caspase-3的表达和活性, 增强化疗药物对癌细胞的诱导凋亡作用.
Keywords: 胃癌; XIAP基因; 反义RNA; 基因表达; 细胞凋亡