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世界华人消化杂志. 2007-09-18; 15(26): 2831-2834
Published online 2007-09-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i26.2831
Published online 2007-09-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i26.2831
抑制性消减杂交技术筛选γ-氨基丁酸调节的肝星状细胞系靶基因
樊文梅, 李国力, 魏红山, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 1000111
通讯作者: 魏红山, 100011, 北京市安外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. dr_liver@hotmail.com
电话: 010-64211031-2358 传真: 010-64281540
收稿日期: 2007-05-24
修回日期: 2007-09-01
接受日期: 2007-09-11
在线出版日期: 2007-09-18
修回日期: 2007-09-01
接受日期: 2007-09-11
在线出版日期: 2007-09-18
Abstract
目的: 应用抑制性消减杂交技术(SSH)筛选γ-氨基丁酸(GABA)作用肝星状细胞系HSC-T6后的差异表达基因.
方法: 10 μmol/L的GABA作用于HSC-T6细胞24 h, 提取mRNA, 用分光光度计进行定量分析. 以GABA处理和未处理的T6细胞mRNA为模板逆转录合成双链cDNA(dscDNA), 并分别标记为Tester和Driver, 酶切后与接头连接, 经两次杂交, 构建消减杂交文库, 将消减文库的扩增产物进行转化、克隆分析后应用生物信息学技术将测得序列再进行同源性分析.
结果: 15种基因表达上调, 其中包括与DNA合成、线粒体、肿瘤抑制以及凋亡相关的4类基因, 结果显示GABA可能促进HSC-T6细胞增殖而抑制凋亡.
结论: 用SSH技术可以成功获得GABA刺激肝星状细胞基因上调的监测, 证明GABA能够影响肝星状细胞的基因表达谱.
Keywords: γ-氨基丁酸; 肝星状细胞; 抑制性消减杂交