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世界华人消化杂志. 2007-08-08; 15(22): 2394-2398
Published online 2007-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i22.2394
Published online 2007-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i22.2394
隐源性肝炎相关新基因CHBP2的原核表达及蛋白纯化
李锟, 叶进, 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科 湖北省武汉市 430022
肖凡, 李国力, 洪源, 魏红山, 北京地坛医院传染病研究室 北京市 100011
李锟, 华中科技大学同济医学院2004级硕士研究生, 主治医师, 主要从事肝病的分子生物学及临床研究.
通讯作者: 叶进, 430022, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科. yejin8688@sina.com
电话: 027-85726381
收稿日期: 2007-03-04
修回日期: 2007-07-18
接受日期: 2007-07-28
在线出版日期: 2007-08-08
修回日期: 2007-07-18
接受日期: 2007-07-28
在线出版日期: 2007-08-08
Abstract
目的: 构建隐源性肝炎相关新基因CHBP2原核表达载体, 在大肠杆菌中进行表达, 并纯化CHBP2融合蛋白.
方法: 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR), 以提取的Huh7细胞mRNA为模板, 扩增获得CHBP2基因片段, 连接到pGEM-T载体, 测序正确后插入至原核表达载体pET-32a(+)中, 构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2, 转化大肠杆菌BL21, 以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导, 获得CHBP2融合蛋白的可诱导性表达, 通过SDS-PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实蛋白表达的特异性. 超声破碎表达细菌, SDS-PAGE分析. 利用镍离子亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.
结果: 成功构建原核表达载体pET-32a(+)-CHBP2, 并将CHBP2融合蛋白成功表达, 通过Western blot免疫印迹, 证实了蛋白表达的特异性. SDS-PAGE分析表明其为包涵体表达, 并对蛋白成功进行了纯化和复性, 获得了表达蛋白的纯品.
结论: 成功表达、纯化CHBP2蛋白, 为研究CHBP2蛋白的生物学功能打下了基础.
Keywords: 隐源性肝炎; CHBP2; 原核表达; 蛋白纯化