临床研究
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世界华人消化杂志. 2007-07-08; 15(19): 2128-2132
Published online 2007-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i19.2128
PCR快速检测腹泻患者粪中痢疾杆菌致病基因ipaH和ial
李小丽, 阴赪宏, 温艳, 黄敏君, 栗绍刚, 齐志群, 李威
李小丽, 阴赪宏, 温艳, 黄敏君, 栗绍刚, 齐志群, 李威, 北京热带医学研究所 首都医科大学附属北京友谊医院 北京市 100050
李小丽, 2005级首都医科大学附属北京友谊医院硕士生, 主要从事细菌性痢疾的研究.
通讯作者: 阴赪宏, 100050, 北京市宣武区永安路95号, 首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所. modscn@yahoo.com.cn
电话: 010-63138552
收稿日期: 2007-04-27
修回日期: 2007-05-11
接受日期: 2007-05-24
在线出版日期: 2007-07-08
Abstract

目的: 建立一种快速、特异、敏感的分子生物学诊断方法对腹泻患者粪中痢疾杆菌致病基因ipaH及ial进行检测.

方法: 分别应用常规培养生化血清学鉴定方法、普通PCR、巢氏PCR(nested-PCR)方法, 对71例腹泻患者粪标本进行检测. 痢疾杆菌致病基因ipaH及ial的扩增产物经电泳分离.

结果: 在71例腹泻患者粪标本中, 常规培养生化血清学鉴定方法分离出福氏痢疾杆菌24例, 宋内痢疾杆菌23例, 志贺痢疾杆菌1例, 沙门菌23例. 采用普通PCR法检测痢疾杆菌粪标本48例, ipaH基因均阳性(100%); ial基因阳性34例(70.8%), 余14例为阴性. 对该14例粪标本进而采用巢氏PCR法进行ial基因扩增, 其中12份标本阳性. 48例痢疾杆菌粪标本中46例ipaH和ial基因为双阳性(46/48). 沙门菌粪标本23例中ipaH及ial基因表达均为阴性. 以上两种方法的诊断一致性检验Kappa = 0.937, 差异有统计学意义(P<0.05). 71例腹泻患者粪标本采用PCR和巢氏PCR法扩增得到的ipaH和ial基因特异片段与基因库中发表的标准菌株序列比较, 一致性为100%.

结论: 建立了快速诊断腹泻患者粪中痢疾杆菌致病基因ipaH和ial的PCR检测方法, 具有简便、快速、特异和敏感的特点.

Keywords: 痢疾杆菌; 粪便; 聚合酶链反应; ipaH基因; ial基因