基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-06-18; 15(17): 1899-1904
Published online 2007-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i17.1899
结肠癌耐药细胞株LoVo/5-FU的建立及其差异表达基因的筛选
盛雅萍, 李建芳, 刘炳亚, 罗建明, 郑磊贞, 陈强, 郭伟剑
盛雅萍, 郑磊贞, 陈强, 郭伟剑, 上海交通大学医学院附属新华医院肿瘤科 上海市 200092
李建芳, 刘炳亚, 上海交通大学医学院附属瑞金医院消化外科研究所 上海市 200025
罗建明, 上海复旦大学附属肿瘤医院中心实验室 上海市200032
盛雅萍, 2002年南京医科大学本科毕业, 2004年至今就读于上海交通大学医学院, 肿瘤学硕士研究生.
通讯作者: 郭伟剑, 200092, 上海交通大学医学院附属新华医院肿瘤科. guoweijian1@sohu.com
电话: 021-65010796
收稿日期: 2007-02-06
修回日期: 2007-03-01
接受日期: 2007-03-01
在线出版日期: 2007-06-18
Abstract

目的: 建立结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU并初步筛选可能的耐药相关基因.

方法: 采用5-FU浓度递增法建立人结肠癌细胞耐药模型LoVo/5-FU, 观察其生长规律并绘制细胞生长曲线; 用MTT法鉴定耐药细胞株耐药性并计算耐药指数(RI); 用基因芯片技术检测耐药细胞株LoVo/5-FU与其亲本细胞株LoVo中的差异表达基因, 从中筛选出可能的耐药相关基因; 用半定量RT-PCR方法对筛选出的部分耐药相关基因在耐药细胞及其亲本细胞中的表达情况进行验证.

结果: LoVo/5-FU细胞与LoVo细胞相比, 生长缓慢, 细胞体积增大. LoVo/5-FU对5-FU、ADM、MMC耐药, 而对CDDP无耐药性(RI: 7.69, 2.78, 1.43和0.96). 通过基因芯片筛选出差异表达基因425个, 可能的耐药相关基因包括CYP1B1, NAT2, RNF20, SNAI2, MAP3K2, 其中CYP1B1在LoVo/5-FU与LoVo中的表达有明显差异(Cy5/Cy3 = 5.877).

结论: LoVo/5-FU细胞株耐药性稳定, 耐药机制可能与CYP1B1, NAT2等耐药相关基因有关.

Keywords: 结肠癌; 耐药相关基因; 5-氟尿嘧啶; LoVo/5-FU细胞株; MTT法; 基因芯片; 逆转录-聚合酶链反应