基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-05-08; 15(13): 1488-1493
Published online 2007-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i13.1488
转基因细胞模型L02/HBx的构建及HBx对细胞周期的影响
程斌, 林松挺, 杨玉珍, 黎培员
程斌, 林松挺, 杨玉珍, 黎培员, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科 湖北省武汉市 430030
程斌, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科副教授, 主要从事乙肝相关性肝癌发生机制的基础研究及内镜超声的临床研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30570821.
通讯作者: 程斌，430030，湖北省武汉市解放大道1095号，华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科. b.cheng@tjh.tjmu.edu.cn
电话: 027-83663612 传真: 027-83646605
收稿日期: 2007-01-10
修回日期: 2007-02-04
接受日期: 2007-03-17
在线出版日期: 2007-05-08
Abstract

目的: 构建L02/HBx转基因细胞模型并研究HBx对肝细胞周期的影响.

方法: 运用脂质体转染和G418筛选获得L02/HBx阳性克隆, 并分别用RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达. 进一步用四唑蓝(MTT)比色试验、流式细胞仪检测L02/HBx的增殖、凋亡和细胞周期.

结果: RT-PCR和Western blot分别检测到L02/HBx细胞中HBx mRNA和蛋白的表达. MTT比色试验显示L02/HBx生长速度加快, 流式细胞仪检测发现L02/HBx凋亡率低(0.09%±0.13% vs 3.74%±1.29%, P<0.05), G1期细胞比例减少(61.35%±0.82% vs 67.80±6.84%, P<0.05), S期细胞比例相应增加(36.59%±2.54% vs 22.37%±2.17%, P<0.05). 经阿霉素(ADM)培养后, L02/HBx的凋亡率显著增加(34.91%±5.85% vs 0.09%±0.13%, P<0.05), G1期细胞比例明显增加但低于对照组(82.81%±6.48% vs 61.35%±0.82%, P<0.05; 82.81%±6.48% vs 87.19%±1.92%, P<0.05), S期细胞比例降低但较对照组高(13.84%±6.16% vs 36.59%±2.54%, P<0.05; 13.84%±6.16% vs 2.22%±1.26%, P<0.05).

结论: L02/HBx构建成功, HBx能促进细胞周期进程, 加快细胞的生长并抑制细胞的凋亡; 转染HBx基因的肝细胞凋亡更易受凋亡因子所触发, 表明HBx可能会增加正常肝细胞对诱导凋亡因素的敏感性.

Keywords: HBx基因; 细胞周期; 细胞模型; 细胞凋亡; 流式细胞术; MTT法; 逆转录-聚合酶链反应; 免疫印迹; 肝细胞癌