Published online 2007-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i13.1475
修回日期: 2007-02-04
接受日期: 2007-02-08
在线出版日期: 2007-05-08
目的: 研究大鼠肝卵圆细胞(HOC)增殖模型肝脏缝隙连接蛋白32, 43(CX)的表达及缝隙连接细胞间通讯(GJIC)的功能, 探讨HOC增殖的可能机制.
方法: 健康♂Wistar大鼠, 随机分成正常对照组(n = 6), 模型组. 模型组大鼠按每天20 mg/kg剂量灌喂2-AFF, 连续4 d, 第5天不灌喂行2/3肝切除, 术后次日按每天20 mg/kg剂量继续灌喂5 d (2-AFF/PH). 模型组在术后4 h, 4, 8, 12和16 d随机取6只大鼠检测. 采用组织病理技术观察肝组织的形态学变化; 免疫组化和细胞形态学方法计数HOC; 切开标记/染料示踪技术(incision loading/dye transfer, IL/DT)技术确定GJIC; 免疫组化及RT-PCR技术检测CX32蛋白及mRNA表达; 免疫组化、Western blot及RT-PCR技术分析CX43蛋白及mRNA水平.
结果: 对照组及模型组4 h未见HOC增殖. 模型组4 d汇管区有HOC增殖反应, 8 d HOC增殖达峰值, 12 d HOC从汇管区向肝实质内浸润, 16 d HOC增殖减少较12 d减少; IL/DT检测结果显示, 模型组各时点(4 h, 4, 8, 12和16 d)染料扩散距离低于对照组(84.5±3.4, 60.6±3.3, 108.6±4.2, 150.6±2.6, 199.6±3.7 μm vs 250.0±5.0 μm, P<0.01), GJIC功能降低. 模型组各时点CX32表达均低于对照组(P<0.05), 在4 h下调, 4 d达低峰(2.85±0.39), 8 d后逐渐恢复; RT-PCR显示模型组CX32 mRNA在4 h开始下降, 4 d达低峰(0.33±0.11), 8 d后逐渐恢复, 16 d高于对照组, 但无显著差异(P>0.05). Western blot结果显示模型组CX43蛋白表达在4 h上调(P>0.05)、4-16 d明显升高; RT-PCR显示模型组4 h CX43 mRNA上调(P>0.05), 4 d表达明显升高, 12 d达高峰(5.46±0.58), 16 d低于对照组, 但无显著差异(P>0.05).
结论: 采用Solt-Farber方法成功建立了HOC增殖动物模型; 大鼠2-AAF/PH肝脏CX表达呈时空特异性变化, 使肝脏GJIC功能抑制. 肝脏的GJIC抑制可能启动了HOC增殖.