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世界华人消化杂志. 2007-04-28; 15(12): 1421-1424
Published online 2007-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i12.1421
Published online 2007-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i12.1421
应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA
刘蓉, 李明远, 四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室 四川省成都市 610041
张发强, 夏增亮, 闫乃红, 王玲, 卢亦路, 夏庆杰, 四川大学华西分子遗传实验室 四川省成都市 610041
陈清英, 卢军, 夏军, 重庆市涪陵区生殖健康保健中心 重庆市 40800
基金项目: 国家自然科学基金资助课题, No. 39880025.
通讯作者: 夏庆杰, 610041, 四川省成都市高新区科园四路1号, 四川大学华西医院分子遗传实验室. xiaqj2005@126.com
电话: 028-81812855 传真: 028-85164005
收稿日期: 2007-01-15
修回日期: 2007-02-01
接受日期: 2007-02-08
在线出版日期: 2007-04-28
修回日期: 2007-02-01
接受日期: 2007-02-08
在线出版日期: 2007-04-28
Abstract
目的: 建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR), 并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.
方法: 根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物, 和一条特异的TaqMan探针; 根据上述引物序列, 采用分子克隆技术制备内对照DNA; 再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针; 将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中, 使其与HBV靶序列共扩增.
结果: 在30 μL CFQ-PCR反应体系中, 加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线; 经琼脂糖凝胶电泳分析, 加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号; 在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本, 60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本, 后经DNA纯化处理, 上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果, 其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.
结论: CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性, 适合临床推广应用.
Keywords: 乙型肝炎病毒; 竞争性荧光定量聚合酶链反应; 假阴性