Published online 2007-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v15.i11.1225
修回日期: 2007-01-05
接受日期: 2007-01-27
在线出版日期: 2007-04-18
目的: 体外研究Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN)转染对人胆囊癌GBC-SD细胞VEGF, Flt-1及KDR mRNA表达和VEGF蛋白分泌的影响.
方法: 运用Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸(ASODN)和错义寡核苷酸(Scrambled Oligodeoxynucleotide, SODN)转染人胆囊癌细胞GBC-SD, 半定量RT-PCR检测转染后各组细胞不同时间的VEGF, Flt-1及KDR mRNA表达变化, ELISA测定转染后各组细胞培养上清液VEGF蛋白浓度.
结果: 半定量RT-PCR发现ASODN组及ASODN+Oligofectamine组24, 48, 72, 96 h VEGF (ASODN组VEGF165: 0.686±0.033, 0.569±0.049, 0.489±0.036, 0.716±0.017; ASODN组VEGF121: 0.462±0.046, 0.338±0.034, 0.219±0.022, 0.471±0.038; ASODN+Oligofectamine组VEGF165: 0.601±0.021, 0.465±0.042, 0.416±0.023, 0.662±0.035; ASODN+Oligofectamine组VEGF121: 0.408±0.014, 0.286±0.019, 0.157±0.021, 0.418±0.037)、Flt-1 (ASODN组: 0.694±0.019, 0.562±0.045, 0.435±0.042, 0.724±0.026; ASODN+Oligofectamine组: 0.609±0.018, 0.442±0.049, 0.314±0.015, 0.614±0.029)及KDR (ASODN组: 0.667±0.063, 0.490±0.033, 0.301±0.029, 0.665±0.068; ASODN+Oligofectamine组: 0.523±0.048, 0.432±0.027, 0.218±0.036, 0.524±0.037) mRNA的表达显著低于Control组(P<0.05), 且ASODN+Oligofectamine的抑制作用比ASODN强(P>0.05). ELISA测定结果显示ASODN组(281.26±18.62, 526.44±34.95, 791.13±20.99)及ASODN+Oligofectamine组(250.7±14.57, 506.09±19.14, 711.79±19.91) 24, 48, 72 h VEGF蛋白的分泌浓度均显著低于Control组(394.23±16.26, 711.6±26.21, 933.85±28.65)(P<0.05), 且ASODN+Oligofectamine的抑制作用比ASODN强(P>0.05).
结论: Oligofectamine介导的VEGF ASODN能抑制GBC-SD细胞VEGF, Flt-1及KDR mRNA表达和VEGF蛋白分泌.