修回日期: 2006-10-11
接受日期: 2006-10-18
在线出版日期: 2007-01-08
目的: 研究缬草波春诱导胃癌细胞凋亡, 探讨其诱导凋亡与半胱氨酸酶(Caspase)及生存素(Survivin) mRNA、P53蛋白、Survivin蛋白表达的关系.
方法: 以100 mg/L的缬草波春作用于加Caspase-3抑制剂、Caspase-8抑制剂、Caspase-9抑制剂和未加Caspases抑制剂培养的MKN-45细胞24, 48和72 h, 用流式细胞仪分别检测细胞凋亡率; 不同浓度的缬草波春(5, 10, 25, 50, 100 mg/L)作用MKN-45细胞不同时间(24, 48, 72 h)后, 用tripure提取液提取细胞RNA, 用RT-PCR法, 检测Survivin mRNA的表达. 不同浓度缬草波春(50和100 mg/L)作用MKN-45胃癌细胞株24 h后, 用免疫组化的方法, 检测P53蛋白和Survivin蛋白的表达.
结果: 单用Caspase抑制剂组, 作用24, 48和72 h对MKN-45细胞凋亡率无明显影响, 与对照组比较差异无显著意义. Caspase-3抑制剂、Caspase-9抑制剂与缬草波春联合应用后24, 48和72 h使MKN-45细胞凋亡率高于对照组(24 h: 5.73%, 5.41% vs 4.38%, P<0.01; 48 h: 6.88%, 6.32% vs 4.35%, P<0.01; 72 h: 7.72%, 8.62% vs 4.54%, P<0.01), 低于缬草波春组(24 h: 5.73%, 5.41% vs 8.14%, P<0.01; 48 h: 6.88%, 6.32% vs 12.31%, P<0.01; 72 h: 7.72%, 8.62% vs 26.41%, P<0.01), 与对照组及缬草波春组比较差异均有显著意义(P<0.01). Caspase-8抑制剂与缬草波春联合应用后24, 48和72 h MKN-45细胞凋亡率明显增加, 与对照组比较差异有显著意义(8.02% vs 4.38%, P<0.01; 11.05% vs 4.35%, P<0.01; 24.86% vs 4.54%, P<0.01), 与单用缬草波春组比较差异无显著意义. 缬草波春降低MKN-45胃癌细胞株Survivin mRNA的表达, 并有浓度依赖性和时间依赖性, 而且使MKN-45胃癌细胞株P53蛋白表达增加, Survivin蛋白表达降低, 均有浓度依赖性.
结论: 缬草波春可诱导MKN-45细胞凋亡, 其作用可部分被Caspase-3, Caspase-9抑制剂所抑制, 但不能被Caspase-8抑制剂所抑制. 缬草波春诱导MKN-45胃癌细胞株凋亡与P53蛋白表达提高及Survivin mRNA和Survivin蛋白低表达降低有关.