基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-03-18; 14(8): 758-762
Published online 2006-03-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i8.758
自身抗原核点蛋白Sp100基因克隆和真核表达
王雪松, 李永哲, 刘国振
李永哲, 王雪松, 中国医学科学院中国协和医科大学、北京协和医院检验科, 北京市 100730
刘国振, 中国科学院北京华大基因研究中心 北京市 101300
王雪松, 女, 1979-06-23生, 吉林省吉林市人, 汉族, 2006年北华大学医学院毕业, 在读硕士, 主要从事自身免疫性疾病研究.
基金项目: 国家自然科学基金项目, No. 30471617; 国家高技术研究发展计划(863计划)重大专项基金资助项目, No. 2002AARZ2011.
通讯作者: 李永哲, 100730, 北京市, 中国医学科学院中国协和医科大学、北京协和医院检验科. yongzhelipumch@yahoo.com.cn
电话: 010-65295416 传真: 010-65295416
收稿日期: 2006-01-11
修回日期: 2006-02-05
接受日期: 2006-02-08
在线出版日期: 2006-03-18
Abstract

目的: 克隆人核点蛋白自身抗原Sp100基因, 构建重组表达质粒, 获得具有免疫学活性的纯化重组蛋白.

方法: 从人类肝脏cDNA文库中扩增出Sp100的基因片段, 克隆至PEGH表达载体进行诱导表达, 并对表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)鉴定.

结果: 经重组质粒测序结果证实, Sp100目的基因已正确插入真核表达载体中, 基因序列正确, 符合表达框架; SDS-PAGE检测表达产物分别在53 ku, 55 ku, 52 ku, 37 ku, 42 ku, 47 ku 处有一明显的蛋白表达条带, Western blot分析表明重组蛋白2, 3, 5, 6具有人Sp100抗原反应性.

结论: 本研究成功克隆人核点蛋白自身抗原Sp100基因, 并将其在酵母菌中成功表达.

Keywords: 原发性胆汁性肝硬化; 核点蛋白Sp100基因; 自身抗原; 克隆