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靶向siRNA抑制幽门螺杆菌vacA表达
赵刚, 詹文华, 严燕国, 马晋平, 彭俊生, 董文广, 蔡世荣, 何裕隆, 中山大学附属第一医院胃肠胰外科, 中山大学胃癌诊治中心 广东省广州市 510080
赵刚, 男, 1968-03-07生, 哈尔滨人, 汉族, 2001年哈尔滨医科大学医学博士, 2003年中山大学附属第一医院胃肠胰外科博士后, 副教授, 副主任医师, 主要从事胃肠道肿瘤外科和分子生物治疗方面的研究.
基金项目: 国家自然基金资助项目 , No. 30271276 ; 广东省自然科学基金 , No. 021891 .
通讯作者: 詹文华, 510080, 广东省广州市, 中山大学附属第一医院胃肠胰外科, 中山大学胃癌诊治中心. wenhuazh@21cn.com
电话: 020-88533958
收稿日期: 2005-11-08
修回日期: 2005-11-30
接受日期: 2005-12-10
在线出版日期: 2006-02-18
修回日期: 2005-11-30
接受日期: 2005-12-10
在线出版日期: 2006-02-18
Abstract
目的: 观察靶向siRNA能否抑幽门螺杆菌(H. pylori )vacA基因表达.
方法: 合成靶向 H. pylori vacA基因5对特异siRNA(实验组: vacA-s1, vacA-s2, vacA-s3, vacA-s4, vacA-s5)和1对非特异siRNA(对照组). 通过电穿孔法使siRNA转化至H. pylori内, 观察转化效率和转化1, 6, 12, 24, 48 h mRNA和蛋白表达的抑制率, 并将PCR产物克隆和测序 .
结果: 电穿孔转化效率平均为89%. vacA-s2、vacA-s4组在转化1 h vacA mRNA表达抑制率达最大值, 1, 6, 12 h抑制率分别为65%和77%, 43%和50%, 17%和9%, 24和48 h时vacA mRNA表达无抑制效应, 与vacA-s1、vacA-s3、vacA-s5、vacA-s6组相比有显著差异(P<0.05), 因为vacA-s1、vacA-s3、vacA-s5、vacA-s6组转化后各时间点mRNA表达无变化. vacA-s2和vacA-s4组在转化1, 6, 12, 24 h时vacA蛋白表达抑制率分别为26%和17%, 47%和40%, 70%和75%, 33%和30%, 与vacA-s1、vacA-s3、vacA-s5、vacA-s6组相比有显著差异(P<0.05); 转化48 h则无抑制效应. PCR产物克隆和测序与相应报道序列比较, 同源性为99%.
结论: 靶向siRNA可以通过电穿孔法转化并特异地抑制H. pylori vacA基因表达.
Keywords: RNA干扰; 空泡毒素A; 幽门螺杆菌