Published online 2006-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i36.3443
修回日期: 2006-10-03
接受日期: 2006-10-11
在线出版日期: 2006-12-28
目的: 研究益气活血软坚解毒方(YHRJ)含药血清对人肝癌细胞系Bel-7402细胞凋亡调控基因Fas, FasL, Bcl-2, Bax, P53, NF-κB表达影响.
方法: 将细胞分为对照组(NS)组、NS+DDP (顺氯氨铂)组、YHRJ等剂量组(YHRJD)、YHRJD+DDP组、YHRJ高剂量组(YHRJG)、YHRJG+DDP组, 应用流式细胞术、免疫组化、原位杂交、RT-PCR等方法对用药24, 48 h的Bel-7402细胞凋亡的主要调控基因Fas, FasL, Bcl-2, Bax, P53, NF-κB mRNA与蛋白表达进行检测.
结果: 流式细胞术检测显示: 与NS组相比, NS+DDP、YHRJD、YHRJD+DDP及YHRJG+DDP组Fas蛋白表达均明显提高(30.12%±22.94%, 10.50%±8.41%, 30.35%±22.98%, 32.61%±26.87% vs 8.77%±6.93%, P<0.01), YHRJG组效果不明显(P>0.05); NS+DDP、YHRJD+DDP组FasL蛋白表达也升高(16.40%±7.168%, 8.41%±6.74% vs 4.12%±2.60%, P<0.01), 而YHRJG组FasL蛋白表达降低(3.05%±2.53% vs 4.12%±2.60%, P<0.01). 免疫组化结果显示: 除YHRJG+DDP组外, 其余各组突变型P53蛋白表达明显降低(30.2%, 14.6%, 19.8%, 17.3% vs 60.0%, P<0.05); 各加药组Bax蛋白表达明显增高(40.7%, 40.4%, 72.1%, 68.9%, 42.2% vs 30.0%, P<0.05); NS+DDP组与YHRJG组Bcl-2蛋白表达明显降低(26.3%, 24.4% vs 30.5%, P<0.05), 而YHRJD、YHRJG+DDP、YHRJG+DDP组Bcl-2表达明显升高(41.8%, 39.3%, 45.6% vs 30.5%, P<0.05); 各加药组NF-κB蛋白表达明显降低(15.9%, 13.3%, 14.1%, 7.8%, 14.6% vs 24.2%, P<0.05). 原位杂交结果显示: 各加药组NF-κB mRNA表达明显降低(30.5%, 13.3%, 21.4%, 17.4%, 53.2% vs 58%, P<0.05). RT-PCR结果显示: YHRJ等效剂组凋亡调控基因Bcl-2 mRNA表达明显降低(0.717±0.198 vs 1.327±0.097, P<0.001); DDP、YHRJD、YHRJG组凋亡调控基因Bax mRNA表达明显增高(46.22±6.22, 56.19±7.36, 62.32±11.06 vs 35.22±4.38, P<0.05).
结论: YHRJ含药血清诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞凋亡可能的基因调控机制在于通过抑制凋亡信号转导基因FasL基因蛋白表达, 促进凋亡调控基因Bax基因蛋白表达, 抑制NF-κB基因mRNA及蛋白表达来实现的.