基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-11-08; 14(31): 2991-2996
Published online 2006-11-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i31.2991
Apoptin基因对人胃癌细胞BGC-823的抑制效应及与凋亡信号转导的关系
李霄, 金宁一, 连海, 陈立刚, 孙丽丽, 李萍
李霄, 金宁一, 连海, 李萍, 军事医学科学院全军基因工程重点实验室 吉林省长春市 130062
陈立刚, 吉林大学白求恩医学部第一临床医院消化内科 吉林省长春市 130021
孙丽丽, 吉林大学白求恩医学部第二临床医院耳鼻咽喉科 吉林省长春市 130041
李霄, 2006年吉林大学博士, 助理研究员, 主要从事肿瘤基因治疗研究.
基金项目: 国家自然科学基金重大项目资助项目, No. 39893290-4-3.
通讯作者: 金宁一, 130062, 吉林省长春市, 军事医学科学院全军基因工程重点实验室. skylee528112@yahoo.com
电话: 0431-6985921 传真: 0431-7983322
收稿日期: 2006-07-09
修回日期: 2006-08-20
接受日期: 2006-09-12
在线出版日期: 2006-11-08
Abstract

目的: 探讨Apoptin基因对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用及其参与胞内细胞信号转导的机制.

方法: 应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin体外转染BGC-823细胞, 运用噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)分析法检测重组质粒对BGC-823肿瘤细胞的抑制作用; 通过AO/EB染色法对pVAX1-Apoptin转染的肿瘤细胞进行形态学观察; 运用流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(△Ψm); 通过免疫印迹检测细胞色素c(cytochrome c, Cyto c)释放; 应用底物显色法检测Caspase-3/9活性.

结果: pVAX1-Apoptin转染比pVAX1具有更强的抑瘤效应(10 μg质粒转染72 h后, 23.37% vs 99.61%, P<0.01), 并且肿瘤细胞的死亡方式以凋亡为主. 实验结果显示, pVAX1-Apoptin转染导致细胞线粒体跨膜电位下降, 与pVAX1转染BGC-823细胞相比有显著差异(46.7%±7.26% vs 70.66%±5.98%, P<0.01); 同时伴随细胞色素c的释放. 另外, pVAX1-Apoptin和pVAX1转染细胞的Caspase-3/9活性具有显著差异(Caspase-9: 0.181±0.032 vs 0.079±0.013, P<0.01; Caspase-3: 0.242±0.041 vs 0.058±0.023, P<0.01).

结论: pVAX1-Apoptin转染BGC-823肿瘤细胞导致线粒体跨膜电位下降, 并刺激释放细胞色素c, 从而激活Caspase-9. 经细胞色素c激活的Caspase-9进而活化凋亡通路下游关键作用因子, 并对BGC-823肿瘤细胞产生抑制效应.

Keywords: Apoptin基因; 胃癌; BGC-823细胞系; 细胞凋亡; 抗肿瘤效应