基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-09-18; 14(26): 2605-2609
Published online 2006-09-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i26.2605
幽门螺杆菌5种候选疫苗抗原基因的克隆、表达及抗原性的鉴定
宁云山, 李妍, 龙敏, 董文其, 李明
宁云山, 李妍, 龙敏, 董文其, 李明, 南方医科大学生物技术学院 广东省广州市 510515
宁云山, 2001年第一军医大学博士, 副教授, 主要从事蛋白质与抗体工程研究.
通讯作者: 李明, 510515, 广东省广州市同和, 南方医科大学生物技术学院. mingli@fimmu.com
电话: 020-61648550 传真: 020-61648550
收稿日期: 2006-03-08
修回日期: 2006-04-26
接受日期: 2006-05-24
在线出版日期: 2006-09-18
Abstract

目的: 构建含人H. pylori 5种候选疫苗抗原Lpp20, HspA, UreaseA, CagA, UreaseB的编码基因的重组质粒并研究其抗原性.

方法: 应用PCR技术从H. pylori染色体中扩增编码Lpp20, HspA, UreaseA, CagA, UreaseB的基因片段, 将其T-A克隆和测序, 并与GenBank公布的其他H. pylori菌株基因序列比较, 再将目的基因克隆至融合表达载体pGEX-4T-1上中进行表达, 用GST亲和层析对其进行纯化, 纯化产物用于对29株小鼠抗H. pylori-全菌单克隆抗体(mAb)的鉴定及与H. pylori感染患者血清进行Western blot分析.

结果: 扩增的Lpp20, HspA, UreaseA, CagA, UreaseB基因全长分别为528 bp, 351 bp, 675 bp, 855 bp, 1704 bp (GenBank登录号分别为DQ106902, DQ141574, DQ141577, DQ141575, DQ141576), 与GenBank公布的其他菌株的核酸序列的同源性在95%-99%, 表达Lpp20, HspA, UreaseA, CagA, UreaseB融合蛋白的相对分子质量分别约为48 000, 41 000, 52 000, 60 000, 91 000 Da, 29株小鼠抗H. pylori全菌mAb中针对Lpp20, HspA, UreaseA, CagA, UreaseB抗原的分别为4, 5, 5, 1, 6株, 5种抗原的纯化产物均可被H. pylori感染患者血清特异性识别.

结论: 重组表达的Lpp20, HspA, UreaseA, CagA, UreaseB均具有较好的抗原性.

Keywords: 幽门螺杆菌; 候选疫苗抗原; 克隆; 基因表达; 抗原性