研究快报
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世界华人消化杂志. 2006-09-08; 14(25): 2551-2555
Published online 2006-09-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i25.2551
逆转录病毒介导双靶区反义RNA在转基因小鼠肝细胞中的表达及对HBV DNA复制的影响
张政, 席宏丽, 公维波, 李文刚, 于敏, 曾争, 徐小元
张政, 席宏丽, 公维波, 李文刚, 于敏, 曾争, 徐小元, 北京大学第一医院感染科 北京市 100034
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30271182.
通讯作者: 徐小元, 100034, 北京市大红罗厂街8号, 北京大学第一医院感染科. yangpin@public3.bta.net.cn
电话: 010-66551122-2311
收稿日期: 2006-06-10
修回日期: 2006-06-26
接受日期: 2006-07-10
在线出版日期: 2006-09-08
Abstract

目的: 探讨逆转录病毒介导的乙型肝炎病毒(HBV) X, P单、双靶区的反义RNA在乙型肝炎转基因小鼠肝细胞中HBV复制的影响.

方法: 构建表达HBV X, P双靶区正、反义RNA的重组载体质粒, 与脂质体混合, 注入小鼠体内, 第8周时取小鼠肝脏, 提取肝组织总RNA, 进行逆转录, 将逆转录后的cDNA用PCR扩增, 琼脂凝胶电泳和DNA测序定性, 荧光聚合酶链反应定量; 提取肝组织基因组DNA, 利用荧光聚合酶链反应定量测定HBV DNA含量.

结果: 经过PCR扩增, 琼脂凝胶电泳和DNA测序定性, 荧光聚合酶链反应定量等方法检测到小鼠肝脏内反义RNA得到高效表达; 8 wk后, 对HBV DNA (×105 copies/g)的作用: 与对照组相比(7.24±1.62), 空质粒组(9.49±3.34)及正义RNA组(6.52±1.53)之间无明显差异, 单(2.60±1.13, 2.83±1.67)、双靶区反义RNA组(3.24±0.45)与对照组之间有明显差异(P<0.05), 但单、双靶区反义RNA组间无明显差异(P>0.05).

结论: 将脂质体包裹逆转录病毒载体(质粒)介导的单、双靶区乙肝病毒反义RNA经iv导入转基因小鼠细胞的方法可行; 反义RNA对乙型肝炎病毒转基因小鼠有显著抗HBV复制作用; 对转基因小鼠肝脏中HBV DNA的复制有明显的抑制作用, 但单、双靶区反义RNA组间无明显差异.

Keywords: 乙型肝炎病毒; 反义RNA; 转基因小鼠; HBV DNA