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世界华人消化杂志. 2006-08-28; 14(24): 2395-2400
Published online 2006-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i24.2395
Published online 2006-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i24.2395
抗人大肠癌双价单链抗体基因的构建及表达
严丹丹, 杨福辉, 方瑾, 中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室, 卫生部细胞生物学重点实验室 辽宁省沈阳市 110001
基金项目: 国家自然科学基金资助项目 , No. 85-722-18-02, 20375047 .
通讯作者: 方瑾, 110001, 辽宁省沈阳市和平区北二马路92号, 中国医科大学细胞生物教研室. jfang61@netease.com
电话: 024-23256666-5347
收稿日期: 2006-06-07
修回日期: 2006-06-20
接受日期: 2006-06-30
在线出版日期: 2006-08-28
修回日期: 2006-06-20
接受日期: 2006-06-30
在线出版日期: 2006-08-28
Abstract
目的: 构建抗人大肠癌重组双价单链抗体ND-1sc(Fv)2的融合基因, 并在大肠杆菌中表达.
方法: 采用基因重组技术借助GGGGS Linker序列, 将2个相同的ND-1scFv基因共价连接, 构建pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2表达载体, 并在大肠杆菌中表达双价单链抗体的融合蛋白. 表达产物用Ni-NTA resin亲和层析方法纯化, SDS-PAGE和Western blotting检测表达的目的蛋白. 间接免疫荧光和ELISA检测抗体的免疫活性.
结果: 序列测定表明: ND-1sc(Fv)2基因全长1473 bp, 包含了2个729 bp的scFv序列和15 bp的GGGGS序列. SDS-PAGE和Western blotting检测显示, 融合蛋白的Mr 55500, 与预期值一致. ND-1sc(Fv)2表达产物以不溶性包涵体形式存在, 经亲和层析纯化后蛋白纯度达90%, 间接免疫荧光及ELISA检测表明, ND-1sc(Fv)2保留了亲本抗体的免疫活性, 对表达有相应抗原的靶细胞具有特异结合活性, 其免疫活性明显高于ND-1scFv.
结论: 成功地构建了抗人大肠癌双价单链抗体ND-1sc(Fv)2, 并在大肠杆菌中高效表达. 融合蛋白具有良好的免疫活性.
Keywords: 双价单链抗体; ND-1; 大肠癌; 免疫活性