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世界华人消化杂志. 2006-08-28; 14(24): 2382-2385
Published online 2006-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i24.2382
Published online 2006-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i24.2382
乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白结合蛋白的筛选
田江克, 崔玉芳, 解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所免疫学研究室 北京市 100850
田江克, 刘妍, 纪冬, 王琳, 程勇前, 钟彦伟, 徐东平, 解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心 北京市 100039
成军, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
田江克, 主管技师, 军事医学科学院在职硕士生, 主要从事肝病的临床和基础研究.
基金项目: 北京市自然科学基金资助项目 , No. 5042024 .
通讯作者: 成军, 100011, 北京市东城区安外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-64481639 传真: 010-64281540
收稿日期: 2006-02-13
修回日期: 2006-03-11
接受日期: 2006-03-20
在线出版日期: 2006-08-28
修回日期: 2006-03-11
接受日期: 2006-03-20
在线出版日期: 2006-08-28
Abstract
目的: 用酵母双杂交技术筛选白细胞与乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白(MHBst)结合蛋白.
方法: PCR扩增MHBst基因, 连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒, 转化酵母细胞AH109并在其内表达. 后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合, 在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-a-半乳糖(X-a-gal)上进行双重筛选阳性菌落增菌后提出质粒转化入大肠杆菌(DH5a), 并经氨苄青霉素抗性筛选, 提取单克隆菌落质粒, 酶切鉴定, 序列测定后进行生物信息学分析.
结果: 应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆8个, 经生物信息学分析, 排除读码框架不正确者, 最后得到7种已知基因, 分别为ADP核糖基因子2种, RAB6相互作用蛋白(RAB6IP1)1种, CCR4-NOT转录复合体亚基10(CCR4-NOT-10)1种, 脂多糖蛋白结合蛋白(LBP)1种, 醛缩酶B (ALDOB)1种, 补体成分3(C3)1种, 丙酮酸脱氢酶(PDH)1种.
结论: 成功克隆出MHBst结合蛋白.
Keywords: 酵母双杂交技术; MHBst; 结合蛋白; 克隆