基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-08-18; 14(23): 2294-2300
Published online 2006-08-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i23.2294
人骨髓来源多能成体祖细胞ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02体外共培养向肝样细胞的分化
王海澜, 高毅, 蒋泽生, 慕宁
王海澜, 高毅, 蒋泽生, 慕宁, 南方医科大学珠江医院普外科 广东省广州市 510282
王海澜, 1994年哈尔滨医科大学学士, 2004年南方医科大学博士生, 副主任医师, 从事干细胞诱导分化研究.
基金项目: 广东省十五重点科技攻关专项基金资助项目, No. 2002A3020206.
通讯作者: 高毅, 510282, 广东省广州市, 市南方医科大学珠江医院普外科. gaoyi6146@163.com
电话: 020-61643212
收稿日期: 2006-03-29
修回日期: 2006-04-13
接受日期: 2006-04-20
在线出版日期: 2006-08-18
Abstract

目的: 探索人骨髓来源多能成体祖细胞(ZHJ-MAPCs)在与人肝细胞系L02在体外共培养条件下诱导分化为肝细胞的可行性.

方法: (1)间接共培养: 将第4代ZHJ-MAPCs和人肝细胞系L02仅培养液相通行间接共培养. 分别于培养第1、3、5、7天应用免疫细胞化学法鉴定ZHJ-MAPCs的ALB、AFP、CK-18、CK-19等肝细胞特征性表型表达情况, 并设阳性对照和阴性对照, 计数阳性细胞比率; (2)直接共培养: 将CFSE荧光(绿色)标记的第4代ZHJ-MAPCs与L02(密度均为1×107/L)按照各50%比例混合行直接共培养. 5 d后用SABC-Cy3免疫荧光(红色)双标后在激光共聚焦显微镜下分别观察ZHJ-MAPCs表达ALB, AFP, CK-18的情况. 同样设阳性对照和阴性对照.

结果: (1)间接共培养: AFP在ZHJ-MAPCs间接共培养第1天即表现为强阳性, 随后表达逐渐减弱. ALB在共培养第1天有可疑阳性, 第3天出现较强的阳性, 第5天达到高峰. CK-18在培养第1、3天检测均为阴性, 至第5天开始出现阳性, 第7天表达较前增强. CK-19在各时间点均为阴性着色. (2)直接共培养: 胞质内呈黄色荧光ALB和CK18的阳性细胞即向肝细胞分化的ZHJ-MAPCs在共培养5 d时出现较多, 而AFP阳性表达则仅出现在极个别细胞, 该结果与阳性对照细胞荧光表达类似.

结论: 人骨髓来源的ZHJ-MAPCs与人肝细胞系L02行间接或直接共培养均能够诱导其向成熟肝样细胞定向分化，且直接共培养有提前趋势.

Keywords: 人骨髓来源多能成体祖细胞; 肝细胞; 直接共培养; 间接共培养