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世界华人消化杂志. 2006-08-08; 14(22): 2186-2191
Published online 2006-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i22.2186
Published online 2006-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i22.2186
幽门螺杆菌重组VacA-HpaA IgY的制备
叶翠莲, 杨致邦, 毛小琴, 黄进, 重庆医科大学微生物学教研究室 重庆市 400016
黄伟, 西南大学蚕学与生物技术学院生物技术系 重庆市 402460
张绍兰, 四川省成都医学院免疫学教研室 四川省成都市 610083
叶翠莲, 2003年重庆医科大学硕士生, 主要从事幽门螺杆菌感染的防治研究.
通讯作者: 杨致邦, 400016, 重庆市, 重庆医科大学基础医学院微生物学教研室. dryangfm365@sina.com
电话: 023-68485090 传真: 023-68486859
收稿日期: 2006-04-24
修回日期: 2006-05-10
接受日期: 2006-05-11
在线出版日期: 2006-08-08
修回日期: 2006-05-10
接受日期: 2006-05-11
在线出版日期: 2006-08-08
Abstract
目的: 采用基因工程技术大量表达、提纯幽门螺杆菌(H. pylori)细胞空泡毒素毒性片段, 和黏附素片段的融合蛋白, 以此为抗原, 制备高效价的抗VacA-HpaA蛋黄抗体(IgY).
方法: 大量培养重组菌pQE30-VacA-HpaA-DH5a, 诱导表达获得融合蛋白VacA-HpaA, Ni2+-NTA树脂纯化. 将纯化的重组蛋白免疫鸡, 水稀释法提取IgY, 硫酸铵沉淀法纯化浓缩VacA-HpaA IgY. ELISA法测定抗体产生的时间-效价变化, SDS-PAGE分析纯度, Bradford法测定蛋白含量, Western blot检测其分别对VacA和HpaA抗原的特异性, ELISA法检测效价.
结果: 重组蛋白主要以包涵体形式表达, 免疫鸡后提取的IgY可与该蛋白发生免疫反应, IgY效价总体上随免疫时间增加而升高. 经纯化、浓缩后, 获得纯度为60%左右, 效价为1∶12 800的VacA-HpaA IgY, 蛋白浓度为22 g/L, Western blot显示在Mr27 000和Mr30 000处分别有相应条带, ELISA检测与VacA和HpaA反应的效价分别为1∶3200和1∶6400(P<0.01).
结论: 成功制备了高浓度、高效价的抗重组VacA-HpaA的特异性IgY.
Keywords: 幽门螺杆菌; 重组蛋白; 细胞空泡毒素抗原; 黏附素; 蛋黄抗体