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世界华人消化杂志. 2006-08-08; 14(22): 2174-2179
Published online 2006-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i22.2174
Published online 2006-08-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i22.2174
干扰Fas受体表达的串联shRNA表达载体的构建
刘明社, 赵中夫, 张国英, 张芸, 长治医学院肝病研究所 山西省长治市 046000
王兰, 山西大学生命科学与技术学院 山西省太原市 030006
封江南, 武汉市晶赛生物工程技术有限公司 湖北省武汉市430074
基金项目: 山西省自然基金资助项目 , No. 20051114 .
通讯作者: 赵中夫, 046000, 山西省长治市解放东街161号, 长治医学院肝病研究所. zhaozf_1226@163.com
电话: 0355-3012335
收稿日期: 2006-03-26
修回日期: 2006-05-10
接受日期: 2006-06-14
在线出版日期: 2006-08-08
修回日期: 2006-05-10
接受日期: 2006-06-14
在线出版日期: 2006-08-08
Abstract
目的: 利用pEGFP6-1和pGenesil-1质粒构建针对Fas的2个短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA) 串联表达的载体.
方法: 设计表达2个shRNA结构的互补DNA序列, 经退火成双链, 分别克隆至带有U6启动子的质粒载体pEGFP6-1和pGenesil-1中, 构建重组质粒, 转化大肠杆菌DH5α菌株, 扩增, 提取质粒, 酶切鉴定后测序分析. 分别用SacI+ SalI双酶切重组质粒, 胶回收酶切pEGFP6-1-siFas1大片段和酶切pGenesil-1-siFas2小片段, T4 DNA Ligase连接酶切大、小片段, 得到pEGFP6-1-siFas1+siFas2重组质粒. 转化感受态细胞DH5α, 扩增, 提取串联重组质粒进行酶切鉴定.
结果: 成功构建靶向Fas的2个shRNA串联重组质粒载体pEGFP6-1-siFas1+siFas2. 酶切鉴定和测序分析重组质粒, shRNA编码序列与设计的片段完全一致, 经酶切凝胶电泳证实载体构建成功.
结论: 表达2个靶向Fas的shRNA表达框成功构建在一个重组质粒载体上.
Keywords: Fas; RNAi; shRNA; 串联质粒