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世界华人消化杂志. 2006-07-18; 14(20): 1970-1976
Published online 2006-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i20.1970
Published online 2006-07-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i20.1970
野生型K-ras2诱导结肠癌细胞基因表达谱改变的特征分析
李红, 曹厚法, 中国人民解放军第301医院特需住院部二科 北京市 100853
万军, 李园, 朱美玲, 中国人民解放军第301医南楼消化科 北京市 100853
韩为东, 中国人民解放军第301医院分子生物学室 北京市 100853
李红, 1991年哈尔滨医科大学学士, 1998年军医进修学院老年消化专业博士, 副主任医师, 主要从事消化道肿瘤的分子生物学与胃肠肿瘤的发病机制的研究.
基金项目: 国家自然科学基金青年基金项目 , No. 302000326 .
通讯作者: 李红, 100853, 北京市复兴路28号, 中国人民解放军第301医院特需住院部二科. lihongam@hotmail.com
电话: 010-68295590 传真: 010-68295592
收稿日期: 2006-04-13
修回日期: 2006-05-02
接受日期: 2006-05-22
在线出版日期: 2006-07-18
修回日期: 2006-05-02
接受日期: 2006-05-22
在线出版日期: 2006-07-18
Abstract
目的: 应用基因芯片技术, 检测野生型K-ras2基因在结肠癌Caco2细胞中表达诱发的基因谱改变, 进一步阐明野生型K-ras2基因可能的分子生物学功能.
方法: 抽取正常人的静脉血, 提取RNA, 反转录成cDNA, 以此为模板, 采用PCR方法克隆K-ras2野生型全编码cDNA序列. 以常规的分子生物学技术将获得的K-ras2 cDNA克隆到T Easy载体中进行核苷酸序列的测定, 构建真核表达载体pCI-neo-K-ras2, 以脂质体转染结肠癌细胞系Caco2, 提取mRNA逆转录为cDNA 与转染空白表达载体pCI-neo的Caco2细胞进行cDNA芯片分析.
结果: 构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定证实准确无误, 提取高质量的RNA逆转录为cDNA进行DNA芯片技术分析. 在135个差异表达基因中发现有24个基因表达水平显著上调, 121个基因表达水平显著下调. 差异表达基因与细胞增殖、分化、凋亡和信号传导等有关.
结论: 应用基因表达谱芯片技术成功筛选了野生型K-ras2转染结肠癌细胞后差异表达基因, 反映出野生型K-ras2对细胞增殖、代谢、转录调控等过程的负性调控状态, 为进一步阐明野生型K-ras2可能的生物学功能提供了新的线索.
Keywords: 野生型K-ras2; 结肠癌; 基因芯片