基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-07-08; 14(19): 1859-1863
Published online 2006-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i19.1859
亚砷酸诱导人食管癌细胞株EC109细胞p15INK4B基因的表达
张学彦, 刘铁夫, 刘伟, 崔希威
张学彦, 哈尔滨医科大学附属二院消化科 黑龙江省哈尔滨市 150086
刘铁夫, 哈尔滨医科大学附属四院消化科 黑龙江省哈尔滨市 150000
刘伟, 哈尔滨医科大学附属二院分子实验中心 黑龙江省哈尔滨市 150086
崔希威, 哈尔滨医科大学附属二院计算机中心 黑龙江省哈尔滨市 150086
张学彦, 1996年哈尔滨医科大学学士, 2001年哈尔滨医科大学硕士, 2003年哈尔滨医科大学博士生, 主治医师, 主要从事消化系统肿瘤的防治研究.
基金项目: 黑龙江省科技计划攻关重点项目基金资助, No. GB05C401-09; 黑龙江省卫生厅科研基金资助项目, No. 2004-117.
通讯作者: 张学彦, 150086, 黑龙江省哈尔滨市学府路246号, 哈尔滨医科大学附属二院消化科. zxycxw@sina.com
电话: 0451-86605143 传真: 0451-86695879
收稿日期: 2006-04-13
修回日期: 2006-05-02
接受日期: 2006-05-17
在线出版日期: 2006-07-08
Abstract

目的: 研究亚砷酸(As2O3)对人食管癌EC109细胞株细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p15INK4B (p15)基因表达的影响.

方法: 终浓度2 μmol/L的As2O3加入食管癌EC109细胞系, 采用甲基化特异PCR (MSP)检测食管癌EC109细胞系中p15基因甲基化, 采用RT-PCR和Western blot方法检测As2O3处理前后p15的mRNA和蛋白质水平的表达情况. 用Scion Image软件测量条带灰度值, P15蛋白与ACTB条带的灰度比进行半定量分析.

结果: EC109细胞p15基因发生高甲基化, p15基因不表达. As2O3作用后p15基因甲基化程度明显下降, As2O3作用72, 48, 24 h组和未加药组之间差异均有统计学意义(37.11±3.62, 50.92±5.47, 72.07±7.53 vs 97.23±9.80, P<0.05). As2O3作用24 h后出现p15 mRNA表达, 随As2O3作用时间延长p15 mRNA表达逐渐增强, 各个时间组之间比较, 除了未加药组和加药24 h组之间及加药24 h组和加药48 h组之间差异无统计学意义外, 其余各个时间组之间差异有统计学意义(0.72±0.07 vs 0.58±0.06 vs 0.48±0.07 vs 0.41±0.08, P<0.05). As2O3作用24 h后P15蛋白出现表达, 2 μmol/L作用24-72 h中P15蛋白条带灰度逐渐增强, As2O3作用72, 48, 24 h组和未加药组之间差异均有统计学意义(0.51±0.02 vs 0.21±0.01 vs 0.16±0.02 vs 0.06±0.01, P<0.05), 说明其表达随As2O3作用时间延长而逐渐增强.

结论: As2O3可使食管癌EC109细胞p15基因去甲基化, 使p15基因表达上调, 从而抑制细胞周期进程.

Keywords: 亚砷酸; p15INK4B; 甲基化; 食管癌