基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-06-28; 14(18): 1775-1779
Published online 2006-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i18.1775
HSP70-肿瘤肽复合物的纯化及其对肝癌细胞株HepG-2增殖的作用
隋春阳, 李航宇, 胡勇, 宗志红, 李洪秀, 郭仁宣
隋春阳, 胡勇, 李洪秀, 郭仁宣, 中国医科大学第一临床学院普外二科 辽宁省沈阳市 110001
李航宇, 中国医科大学第二临床学院微创外科 辽宁省沈阳市 110001
宗志红, 中国医科大学生化教研室 辽宁省沈阳市 110001
隋春阳, 2004年中国医科大学博士, 主治医师, 主要从事肝胆外科疾病的研究.
通讯作者: 郭仁宣, 110001, 辽宁省沈阳市, 中国医科大学附属第一医院普外科. sui-chun@163.com
电话: 024-23256666
收稿日期: 2006-05-08
修回日期: 2006-05-20
接受日期: 2006-05-22
在线出版日期: 2006-06-28
Abstract

目的: 应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯化HSP70-肽复合物, 并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响.

方法: 将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和DEAE-Sephacel离子交换层析分离纯化, 所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子质量及性质鉴定, Bradford法测定蛋白浓度; 利用MTT方法检测HSP70-肽复合物对HepG-2细胞增长的情况.

结果: 分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯量蓝鉴定为单一带, 分子质量为70 kDa; Western blot结果证实为HSP70, 每10 g组织最终获得1.5 mg的HSP70; HSP70刺激组12, 48, 72 h与对照组的A值之间有显著差异(0.1 mg/L: t = - 0.2500, P = 0.00; t = -0.1777, P = 0.001; t = -0.3094, P = 0.001; 0.5 mg/L: t = -0.2878, P = 0.00; t = -0.2044, P = 0.00; t = -0.3285, P = 0.00; 1 mg/L: t = -0.3118, P = 0.00; t = -0.2592, P = 0.00; t = -0.1994, P = 0.025; 5 mg/L: t = -0.4007, P = 0.00; t = -0.1302, P = 0.016; t = -0.2537, P = 0.005), 细胞存活率明显高于对照组(P<0.01).

结论: 使用本分离纯化方法可获得高纯度HSP70肽复合物; HSP70肽复合物可以促进HepG-2细胞的生长.

Keywords: HSP70-肿瘤肽复合物; 纯化; 肝癌; HepG-2细胞系; Western blot; MTT