Published online 2006-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i17.1681
修回日期: 2006-04-25
接受日期: 2006-05-08
在线出版日期: 2006-06-18
目的: 研究慢病毒介导的KDR启动子驱动CD/TK双自杀基因系统对大肠肿瘤细胞选择性杀伤作用.
方法: 构建的重组质粒pLenti6/V5-D-KDR-CDglyTK及阳性对照质粒pLenti6/V5-D-GFP在lipofectamine 2000介导下转染293FT细胞, 包装扩增后获得病毒颗粒, 体外感染表达KDR的SW620细胞株和不表达KDR的LS174T细胞株, 荧光显微镜下计数确定阳性对照质粒的感染效率并以RT-PCR方法检测转基因细胞CDglyTK的表达, 然后给予不同浓度的前药5-FC及GCV处理, 观察该体系对不同细胞株的杀伤效应及其旁观者效应.
结果: 重组体对各细胞株的感染率相似, 其感染率随慢病毒滴度的增高而递增. RT-PCR方法检测发现: 除LS174T细胞外, SW620细胞有目的基因CDglyTK的表达. 对于转基因的SW620细胞, 单用GCV(100 mg/L)时, 其存活率为32.34%±2.42%. 单用5-FC(2.0 g/L)时, 存活率为30.56%±2.14%. 而联合应用两者时, SW620细胞存活率为5.36%±1.55%, LS174T细胞存活率为95.48%±1.70%. SW620细胞对前药具有较高的敏感性, SW620与LS174T细胞株对前药敏感性有显著性差异(P<0.001), 双自杀基因的疗效优于任一单自杀基因的疗效(P<0.001). 当转基因细胞比率为40%时, 加入前药GCV和5-FC, SW620细胞存活率为11.42%±2.66%, 而LS174T细胞存活率为99.54%±2.61%, 二者比较差异有显著性意义(P<0.001), 该体系旁观者效应明显.
结论: 慢病毒作为载体有较高的转染效率, KDR基因启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达KDR的大肠肿瘤细胞.