环氧合酶-2对人肝癌细胞增殖和凋亡的调节作用

Abstract

目的: 观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)在肝癌细胞中表达, 探讨COX-2抑制剂celecoxib对肝癌细胞增殖和凋亡的作用. 

方法: 免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究COX-2在肝癌细胞株中表达; MTT法观察COX-2抑制剂对肝癌细胞增殖的影响; 透射电镜及流式细胞仪观察celecoxib诱导肝癌细胞凋亡的作用、对细胞周期的影响及MDR1/P-gp表达的变化; 用RT-PCR方法检测Survivin mRNA药物处理后表达的变化. 

结果: celecoxib对肝癌细胞抑制增殖、诱导凋亡呈时间和剂量依赖性. celecoxib作用HepG₂ 48 h抑制率为70.98%±0.67%(200 μmol/L)、47.93%±1.08% (100 μmol/L); Bel-7402为57.29%±0.67%(200 μmol/L)、43.84%±0.86%(100 μmol/L); 同样浓度但作用20 h, HepG₂为45.51%±1.35%(200 μmol/L), 14.35%±1.55%(100 μmol/L); Bel-7402则为34.35%±0.63%(200 μmol/L), 15.35%±0.88%(100 μmol/L), 不同浓度以及不同作用时间相比均有显著差异(P<0.01); 100 μmol/L celecoxib作用24, 48, 72, 96 h的肝癌细胞凋亡率分别为12.2%±2.44%, 4.0%±1.67%, 20.4%±4.38%, 57.9%±5.74%(HepG₂)和3.0%±1.05%, 18.5%±3.51%, 29.3%±3.25%, 48.4%±4.77%(Bel-7402), 与对照组相比有显著差异(P<0.01); 细胞周期分布改变, G₀/G₁期细胞比例增加, 24, 48, 72 h分别为: 44.17%±1.01%, 59.60%±0.61%, 62.7%±1.22%(HepG₂)和47.80%±0.41%, 58.60%±0.46%, 78.40%±1.95%(Bel-7402), 与对照组比较有显著差异(P<0.01); 对照组PCNA蛋白表达呈强阳性(+++), 经药物处理后表达减弱, 并随时间延长而显著; HepG₂中COX-2蛋白表达明显弱于Bel-7402, 药物处理后表达也不同. Survivin在肝癌细胞株中呈高表达状态, celecoxib作用48 h mRNA表达降至零, 而72 h后表达水平又有上升; 两株肝癌细胞中经celecoxib处理后, MDR1/P-gp表达有降低的趋势(Bel-7402), 或是基本上不受影响(HepG₂).

结论: COX-2抑制剂celecoxib体外对肝癌细胞有较强的细胞毒作用且以剂量、时间依赖方式抑制细胞增殖, 并诱导凋亡, 使细胞周期阻滞于G₁/S期. COX-2与P-gp, Survivin表达密切相关.

Keywords: 环氧合酶-2; 肝癌; 塞来昔布; Survivin; 多药耐药