基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-04-28; 14(12): 1151-1155
Published online 2006-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i12.1151
乳凝集素调节EEI-10细胞IL-2, IL-4及IFN-γ的分泌表达
何振娟, 裴新红, 朱建幸, 杨凌云, 吴圣楣
何振娟, 朱建幸, 杨凌云, 吴圣楣, 上海交通大学医学院附属新华医院儿内科 上海市 200092
裴新红, Lindsley F. Kimball研究所细胞生化实验室 美国纽约 10021
何振娟, 1985年蚌埠医学院学士, 2001年上海第二医科大学(现上海交通大学医学院)博士, 副主任医师, 主要从事儿科黏膜免疫的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30271375.
通讯作者: 何振娟, 200092, 上海市控江路1665号, 上海交通大学医学院附属新华医院儿内科. hezhenjuan@gmail.com
电话: 021-65790000
收稿日期: 2006-02-22
修回日期: 2006-03-01
接受日期: 2006-03-18
在线出版日期: 2006-04-28
Abstract

目的: 探讨乳凝集素调节肠相关淋巴组织淋巴细胞分泌表达细胞因子的作用.

方法: 应用基因重组技术从MCF-7乳腺癌细胞中提取总RNA, 通过逆转录PCR方法得到目的基因(乳凝集素)片段, 利用酶切, 连接等技术, 将目的基因构建至PET28载体内, 转化入DH5α细胞后, 鉴定阳性质粒; 将含有目的基因的阳性质粒转化入表达细胞BL-21, IPTG诱导表达目的蛋白乳凝集素, 应用特异性镍鏊合的亲和层析柱得到纯化的目的蛋白. 利用H3-Tdr法明确乳凝集素剂量与人类肠上皮内淋巴细胞株EEI-10细胞增殖之间的关系. 给予适当剂量乳凝集素作用于EEI-10细胞后, 利用ELISA方法检测EEI-10分泌IL-2, IL-4及IFN-γ浓度, 应用RT-PCR方法检测IL-2, IL-4及IFN-γ mRNA表达.

结果: 酶切阳性的质粒经测序证实与基因文库一致. 所得纯化的目的蛋白进行SDS-PAGE电泳和特异性抗体鉴定, 明确为目的蛋白乳凝集素. 利用H3-Tdr法检测乳凝集素剂量与细胞增殖之间的关系, 结果显示乳凝集素作用剂量为250 mg/L时淋巴细胞增殖显著. 给予乳凝集素处理后细胞培养上清中IL-2(P = 0.0394)和IFN-γ(P = 0.0082)的含量高于未处理细胞组, 而IL-4没有显著的增高; 同时处理后IL-2 mRNA表达量升高, IL-4 mRNA表达量无显著性改变, IFN-γ mRNA表达量明显增高并高于PHA刺激组.

结论: 乳凝集素具有上调EEI-10细胞分泌和表达IL-2和IFN-γ的作用.

Keywords: 乳凝集素; EEI-10; 细胞因子