修回日期: 2005-10-27
接受日期: 2005-10-31
在线出版日期: 2006-01-08
目的: 探讨脂多糖(LPS)对D-半乳糖胺(D-GalN)致敏大鼠在亚致死剂量下的肝损伤作用.
方法: 48只大鼠随机分为三大组, 即6 h、24 h和48 h取材组, 每组各16只动物; 每个大组再分为两个小组, 即处理组和对照组, 各8只大鼠. 所有处理组大鼠均以LPS(50 µg/kg)+D-GalN(300 mg/kg), 用1 mL无菌生理盐水溶解后腹腔内注射, 对照组大鼠仅腹腔内注射1 mL生理盐水. 在相应时间点, 采血查谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和胆红素(BIL); 肝组织常规固定, HE染色后光镜检查; 肝组织细胞凋亡的TUNEL分析采用多聚甲醛固定; 肝组织炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和细胞凋亡诱导基因bax的表达通过RT-PCR的方法检测.
结果: 所有处理组大鼠ALT、AST和TBIL在6 h内即显著升高, 24 h达到峰值, 48 h仍维持于高水平; 肝脏大体形态显示: 肝脏明显肿胀、失去正常红润光泽而略显苍白、表面见散在的点状及片状出血点、质地偏韧; HE染色可见药物处理6 h, 肝组织即呈现充血, 碎片状坏死和大量炎性细胞浸润. 24 h肝细胞开始空泡变性、肿胀, 并见大片坏死及中性粒细胞浸润. 48 h则多数肝细胞空泡状变性, 肝组织小叶结构紊乱, 点状坏死, 炎症细胞浸润较前减少. TUNEL分析显示, 对照组未见凋亡的肝细胞, 6 h处理组仅见少量凋亡细胞, 凋亡指数(AI)为4.3±1.2%, 24 h和48 h处理组肝组织内则见较多的凋亡细胞, AI分别为20.6±3.3%、21.2±5.7%, 但两者P>0.05; 24 h处理组凋亡细胞百分数为15.83%, 对照组凋亡细胞占0.39%, 两组间存在显著差异(P<0.001); 处理组各时间点TNF-α、IL-1β的表达均较对照组显著升高, 其高峰值出现于6 h. 对照组未见bax的表达, 而LPS的应用后6, 24, 48 h的相对表达率为0.193±0.062、0.191±0.043、0.209±0.031.
结论: 亚致死剂量LPS可造成D-GalN致敏大鼠的急性肝损伤; 细胞凋亡是该急性损伤的重要病理形态学改变, 而凋亡的发生可能与LPS诱导bax的表达有关; 本模型是较理想的内毒素性急性肝损伤的实验动物模型.