修回日期: 2005-03-11
接受日期: 2005-03-22
在线出版日期: 2005-05-01
目的: 探讨消瘢方抗肝纤维化作用的机理.
方法: 采用Ⅳ型胶原酶消化及Ficoll密度梯度离心的方法, 分离、培养大鼠肝细胞, 先加入5%、10%、20%药物血清干预体外培养的肝细胞24 h, 再用四氯化碳(CCl4)蒸熏法制造肝细胞损伤模型. 分别用MTT法及荧光实时定量RT-PCR法检测CCl4损伤后肝细胞的增殖、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达, 并检测细胞培养上清中的谷草转氨酶(AST)活性.
结果: 消瘢方药物血清能显著地促进CCl4损伤后肝细胞的增殖(P<0.05, P<0.01). CCl4损伤模型肝细胞内有一定量的caspase-3mRNA表达(6.96±0.69 ng), 加5%、10%、20%正常大鼠血清干预后, 肝细胞caspase-3mRNA的表达(6.31±0.64, 6.01±0.68, 5.54±0.58 ng)稍低于CCl4损伤模型, 加5%、10%、20%消瘢方药物血清干预后, 肝细胞caspase-3mRNA的表达(5.51±0.72, 4.87±0.45, 3.08±0.82 ng)显著下调(P<0.05, P<0.01). CCl4损伤模型肝细胞培养上清中AST活性为1 203.91±86.85 nkat, 加5%、10%、20%正常大鼠血清干预后, 其培养上清中AST活性降低为1 092.39±57.01, 1 025.54±29.17, 996.03±53.68 nkat, 加5%、10%、20%消瘢方药物血清干预后, 其培养上清中AST活性(998.70±30.67, 885.51±44.82, 753.48±35.17 nkat)显著降低(P<0.05, P<0.01). 消瘢方药物血清对CCl4损伤后肝细胞增殖的影响、下调肝细胞caspase-3mRNA的表达及降低肝细胞培养上清中AST活性的作用, 均呈明显的血清浓度依赖关系.
结论: 消瘢方抗肝纤维化机理与其保护肝细胞免受损害、抑制肝细胞凋亡有关.