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Clostridium difficile细胞毒素B羧基末端功能区的克隆与表达
刘红升, 姜泊, 陈村龙, 陈学清, 广州南方医科大学南方医院消化病研究所 广东省广州市 510515
基金项目: 广州市科技攻关计划资助项目, No. 026G2434.
通讯作者: 刘红升, 510515, 广东省广州市, 广州南方医科大学南方医院消化病研究所. liuhs325@163.com
电话: 020-61365830
收稿日期: 2005-02-14
修回日期: 2005-03-01
接受日期: 2005-03-22
在线出版日期: 2005-05-01
修回日期: 2005-03-01
接受日期: 2005-03-22
在线出版日期: 2005-05-01
Abstract
目的: 克隆并表达Clostridium difficile (C difficile)细胞毒素B羧基末端功能区基因, 为探索高效的防治C difficile感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.
方法: 提取C difficile染色体基因, 用PCR方法扩增Toxin B3基因, 将其克隆至表达载体PET22b(+), 用重组质粒转化大肠杆菌[E. coli BL21(DE3)], 并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达. 用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析.
结果: 从C difficile基因组DNA中成功地克隆了毒素B的羧基末端重复区域的1 848 bp基因, 经过双酶切、PCR和测序鉴定分析, 插入到载体的基因与GenBank中公布的C difficile VPI10463的Toxin B3基因序列的同源性为99%. SDS-PAGE显示, 目的基因表达产物的分子质量为71.3 ku, 利用表达载体PET22b(+)表达出蛋白质, 重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%.
结论: 含C difficile Toxin B3基因的PET22b(+)重组质粒能高效表达目的基因. 该重组子的构建为Clostridium difficile相关性疾病的诊断及后期制备疫苗, 提供了有力的保障.
Keywords: 无