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人肝癌组织α-L-岩藻糖苷酶的提取和鉴定
李超, 林菊生, 陶璐薇, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所 湖北省武汉市 430030
陈孝平, 易继林, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科 湖北省武汉市 430030
李超, 男, 1978-04-13生, 湖北省丹江口市人, 汉族, 2003年华中科技大学同济医学院硕士生, 研究方向为肝脏病学.
基金项目: 国家863计划课题项目, No. 2002AA2Z2011.
通讯作者: 林菊生, 430030, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所. linjusheng2001@163.com
电话: 027-83662578
收稿日期: 2005-03-01
修回日期: 2005-03-11
接受日期: 2005-03-22
在线出版日期: 2005-05-01
修回日期: 2005-03-11
接受日期: 2005-03-22
在线出版日期: 2005-05-01
Abstract
目的: 提取人肝癌组织的α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase, AFU)经纯化和鉴定后, 为制备特异性多克隆抗体提供纯化的抗原.
方法: 运用超滤和离子交换层析等方法提取、纯化人肝癌组织的AFU, 并经SDS-PAGE检测蛋白纯度及相对分子质量. 根据荧光底物4-甲基微型酮-α-L-岩藻糖苷(4-methylumbelliferyl-α-L-fucopyranoside, 4-MU-fucoside)和纯化的蛋白在特定条件下反应生成产物4-甲基微型酮(4-methylumbelliferone, 4-MU)的量来检测酶活性. 检测蛋白浓度用Bradford方法.
结果: 提纯并纯化的AFU经SDS-PAGE鉴定有一个亚单位Mr 55 000. 经过一系列纯化步骤后, 肝癌组织的AFU可得到74倍纯化, 15%收率.
结论: 肝癌组织的AFU可通过离子交换层析法提取和纯化并可用于制备抗体.
Keywords: 肝癌; α-L-岩藻糖苷酶; 离子交换层析法