基础研究
Copyright ©The Author(s) 2005. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2005-05-01; 13(9): 1082-1088
Published online 2005-05-01. doi: 10.11569/wcjd.v13.i9.1082
原发性肝癌survivin基因表达及靶向survivin治疗
王颖, 王家马龙, 吴亮
王颖, 王家马龙, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科 湖北省武汉市 430030
吴亮, 华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科 湖北省武汉市 430030
通讯作者: 王颖, 430030, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科. schoolying@sina.com.cn
电话: 027-88237515
收稿日期: 2003-12-12
修回日期: 2004-01-28
接受日期: 2004-02-01
在线出版日期: 2005-05-01
Abstract

目的: 研究原发性肝癌survivin基因表达及治疗靶点作用.

方法: 收集肝癌和癌旁组织40例. Western blot法检测survivin蛋白表达, RT-PCR法检测survivin mRNA. 原位末端标记法检测组织凋亡指数. 设计合成survivin反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide, AS ODN)转染hepG2细胞, 设置空白对照组、脂质体组、正义链组和各浓度AS ODN组. 流式细胞术检测凋亡指数, MTT法检测化疗药物对细胞生长抑制率. 建立原位荷肝癌鼠模型并分为3组: 反义survivin链组、空白对照组及脂质体组. V = ab2/2计算肿瘤体积, 以V治疗后/V治疗前×100%计算生长指数.

结果: 肝癌细胞株和34/40例肝癌组织表达survivin蛋白及mRNA, 癌旁组织无survivin表达. 肝内转移组(93.5%)和门静脉癌栓组(92.8%)survivin蛋白表达阳性率显著高于阴性组(55.6%)和无癌栓组(66.7%)(P < 0.05). 肝内转移组(1.105% ± 0.396)和门静脉癌栓组(1.137% ± 0.404)survivin mRNA水平显著高于阴性组(0.572% ± 0.082)和无癌栓组(0.627% ± 0.122)(P < 0.05). Survivin阳性组织凋亡指数为1.15% ± 0.33%, 显著低于阴性组(4.50% ± 0.83%)(P = 0.00 002). AS ODN组survivin表达减弱, 凋亡指数增高, 200 nmol/L组为10.50% ± 0.76%, 400 nmol/L组为12.99% ± 0.42%, 600 nmol/L组为22.21% ± 1.26%, 明显高于对照组(P < 0.05). 化疗药物对AS ODN组生长抑制率增高, 200 nmol/L组为47.7% ± 4.6%(5-FU)、59.7% ± 3.5%(DDP), 400 nmol/L组为56.8% ± 4.0%(5-FU)、68.2% ± 2.1%(DDP), 600 nmol/L组为85.2% ± 2.3%(5-FU)、79.9% ± 3.7%(DDP), 明显高于对照组(P < 0.05).23/25裸鼠成功建立原位荷肝癌动物模型. AS ODN组肿瘤生长指数为51.0% ± 24.2%, 显著低于空白对照组(70.2% ± 23.4%)和脂质体组(168.0% ± 28.6%)(P < 0.05). AS ODN组凋亡指数为21.97% ± 2.11%, 显著高于空白对照组(3.21% ± 0.57%)和脂质体组(3.07% ± 0.81%)(P < 0.05).

结论: survivin在HCC发生中有重要作用. survivin AS ODN转染能下调survivin表达, 诱导细胞凋亡, 增加HCC细胞对化疗药物敏感性. survivin AS ODN对荷HCC鼠有一定治疗作用.

Keywords: Survivin; 肝细胞癌; 化疗; 反义寡核苷酸