基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-04-01; 13(7): 852-855
Published online 2005-04-01. doi: 10.11569/wcjd.v13.i7.852
HCV核蛋白羧基端信号肽基因缺失突变体的构建、鉴定和真核表达
洪沙, 黄长形, 杨为松, 陈红梅, 李光玉, 王平忠, 陈伟红, 张岩, 李羽
洪沙, 黄长形, 杨为松, 陈红梅, 李光玉, 王平忠, 陈伟红, 张岩, 李羽, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心 陕西省西安市 710038
洪沙, 女, 1969-05-27生, 江苏省苏州市人, 汉族. 1992年西安交通大学医学院本科毕业, 1997年第四军医大学硕士研究生毕业, 2001年在第四军医大学攻读博士学位, 主要从事病毒性肝炎的防治研究.
基金项目: 国家教育部留学回国人员科研启动基金资助项目, No. 2002HG003.
通讯作者: 黄长形, 710038, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心. changxing_h@hotmail.com
电话: 029-83377652
收稿日期: 2004-11-09
修回日期: 2004-12-01
接受日期: 2004-12-08
在线出版日期: 2005-04-01
Abstract

目的: 构建羧基末端缺失核蛋白的真核表达载体并在小鼠肥大细胞瘤细胞株P815细胞中表达.

方法: 用RT-PCR方法从西安地区丙型肝炎患者血清中扩增HCV C区及部分E1区基因并进行克隆、测序, 以此为模板扩增羧基末端缺失突变核蛋白基因片段(C507), 将其定向克隆入真核表达载体pCI-neo中并转染P815细胞, 经间接免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜检测细胞中突变核蛋白(P169)的表达.

结果: 从患者血清中成功克隆出HCV C cDNA, 构建了编码羧基末端缺失核蛋白的重组质粒pCI-507, 并经酶切鉴定和测序证实; 间接免疫荧光染色表明P169主要在P815细胞胞质中表达, 少数可见于细胞核内.

结论: 重组体pCI-507构建正确, 其表达产物P169在P815中得到有效表达, 为在此基础上的DNA免疫研究提供了实验依据.

Keywords: 丙型肝炎病毒; 核蛋白; P815细胞; 羧基末端缺失