研究快报
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世界华人消化杂志. 2005-03-15; 13(6): 787-789
Published online 2005-03-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i6.787
表达ureB/hlyE融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌预防幽门螺旋杆菌感染
焦志勇, 陈旻湖, 朱森林, 李国庆, 胡品津
焦志勇, 广州市南方医科大学南方医院肿瘤科 广东省广州市 510515
陈旻湖, 朱森林, 李国庆, 胡品津, 中山大学附属第一医院消化内科 广东省广州市 510080
通讯作者: 陈旻湖, 510080, 广东省广州市, 中山大学附属第一医院消化内科. chenminhu@gzsums.edu.cn
电话: 020-87755766-8172
收稿日期: 2004-11-23
修回日期: 2004-12-01
接受日期: 2004-12-09
在线出版日期: 2005-03-15
Abstract

目的: 建立表达幽门螺杆菌(H. pylori)尿素酶B亚单位(UreB)与血溶素E(hlyE)融合蛋白的减毒沙门疫苗菌, 并利用H. pylori小鼠感染模型, 研究该疫苗菌对H. pylori感染的免疫保护作用.

方法: 利用分子克隆技术构建携带ureB/hlyE融合基因的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE, 经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列, 并与GeneBank中相关序列进行同源性比较. pTrc99A-ureB/hlyE转化减毒伤寒沙门菌SL3261, 培养后筛选阳性菌落, 抽提质粒进行PCR及酶切鉴定. 表达的UreB/hlyE融合蛋白SDS-PAGE电泳和Western-blotting进行鉴定, 薄层扫描分析蛋白含量. 实验小鼠随机分成4组, 分别灌胃给予生理盐水组、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261组、携带pTrc99A-ureB的SL3261组、携带 pTrc99A-ureB/hlyE的SL3261组. 免疫后4 wk, 予H. pylori 107CFU/只进行攻击(生理盐水组不攻击). 攻击4 wk后处死动物, 取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养, 观察H. pylori定植情况.

结果: 核苷酸序列测定及同源性分析证实, 原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE中所含的H. pylori -ureB及hlyE基因与GeneBank中的H. pylori-ureB和hlyE基因同源性分别为97.42%(1 663/1 707)、99.78%(910/912). 重组减毒沙门氏菌可表达约100 ku的融合蛋白UreB/hlyE, 含量占全菌体蛋白含量的15%; 表达的融合蛋白能与小鼠抗H. pylori血清特异性反应, 具有良好的免疫原性. 动物实验证实, 疫苗组同空白对照组和SL3261组相比, H. pylori定植密度明显下降, 有显著性差异(P<0.05). 表达UreB/hly蛋白的疫苗株组同表达UreB蛋白的疫苗株相比, H. pylori定植密度明显下降, 差异有统计学意义(P<0.05).

结论: 重组疫苗菌对小鼠H. pylori感染具有一定免疫预防作用, hlyE可以增强疫苗株的免疫保护效果.

Keywords: 无