基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-03-15; 13(6): 760-765
Published online 2005-03-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i6.760
可溶性TGF-β1II型受体逆转录病毒表达载体的构建
高巍, 周永兴, 张惠中, 聂青和
高巍, 周永兴, 聂青和, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊治中心 陕西省西安市 710038
张惠中, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院中心实验室 陕西省西安市 710038
高巍, 女, 1971-02-03生, 江苏省镇江市人, 2002年第四军医大学医学博士生. 主要从事肝纤维化方面的研究.
通讯作者: 高巍, 710038, 陕西省西安市, 中国人民解放军第四军医大学唐都医院全军感染病诊治中心. weiwei5858@163.com
电话: 029-83377128
收稿日期: 2005-01-06
修回日期: 2005-01-16
接受日期: 2005-01-26
在线出版日期: 2005-03-15
Abstract

目的: 构建表达人TGF-β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体, 为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础.

方法: 以RT-PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc, 扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM-T-Easy, 挑取阳性克隆酶切鉴定后测序；利用重组DNA技术, 将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中, 重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞, G418筛选, 直至出现抗性克隆, 扩大培养, 测定病毒滴度.

结果: 经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定, 载体插入基因序列、大小、位置均正确, 并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选, 建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系.

结论: 成功构建了重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN, 可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.

Keywords: TGF-βRⅡ-IgG1 Fc基因; RT-PCR; 重组逆转录病毒载体