基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-03-01; 13(5): 626-630
Published online 2005-03-01. doi: 10.11569/wcjd.v13.i5.626
幽门螺杆菌HspA亚基的表达与纯化
刘秀丽, 张兆山, 陶好霞, 展德文, 刘纯杰
刘秀丽, 张兆山, 陶好霞, 展德文, 刘纯杰, 北京生物工程研究所 北京市 100071
刘秀丽, 女, 1971-10-10生, 河北省固安县人, 汉族, 2002年北京生物工程研究所博士研究生毕业, 助理研究员, 主要从事幽门螺杆菌疫苗的研究.
基金项目: 国家高技术研究发展计划资助项目(863计划), No. 2004AA215213.
通讯作者: 刘纯杰, 100071, 北京市丰台东大街20号, 北京生物工程研究所. Liucj@nic.bmi.ac.cn
电话: 010-66948834 传真: 010-63833521
收稿日期: 2004-12-17
修回日期: 2005-01-01
接受日期: 2005-01-26
在线出版日期: 2005-03-01
Abstract

目的: 利用原核表达载体高效表达幽门螺杆菌热休克蛋白A(HspA), 并进行纯化.

方法: PCR扩增hspA基因, 将其克隆至原核表达载体pET22b, pQE-60, pGEX-4T-2中, 转化大肠杆菌, 经IPTG诱导后, SDS-PAGE分析表达. 利用镍离子亲和层析对表达产物进行纯化. 免疫印迹检测蛋白的抗原性.

结果: PCR扩增得到hspA基因, 在载体pQE-60中以HspA和HspA-His6两种形式得到表达, 表达量高达菌体总蛋白的40%以上. 经镍离子亲和层析后, 纯化率分别为88.63%和 86.32%, 但HspA-His6在纯化过程中发生降解. 免疫印迹实验表明, HspA和HspA-His6都有很好的抗原性.

结论: 实现了HspA蛋白的高效表达和纯化, 为幽门螺杆菌HspA亚单位疫苗的免疫实验奠定基础.

Keywords: 幽门螺杆菌; 热休克蛋白A; 重组表达; 纯化