Published online 2005-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i22.2658
修回日期: 2005-08-15
接受日期: 2005-08-26
在线出版日期: 2005-11-28
目的: 研究在实验性暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure, FHF)中肝细胞凋亡的形态学变化以及一氧化氮(nitric oxide, NO)、Fas和Bcl-2对肝细胞凋亡的调控作用.
方法: 脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合应用制备FHF小鼠模型; 采用免疫组化方法检测肝组织Fas及Bcl-2表达, 分别采用硝酸还原酶法和RT-PCR法检测血清NO水平及肝组织iNOS mRNA表达; TUNEL法检测肝细胞凋亡; 在用药后动态观察Fas及Bcl-2表达、血清NO水平及肝组织iNOS mRNA表达及肝细胞凋亡的变化, 并对模型鼠给予iNOS的抑制剂L-NMMA, 动态观察上述指标的变化.
结果: 在FHF模型小鼠中, 用药后2 h开始血清NO水平及iNOS mRNA的表达即升高, 于4 h达高峰; 用药后2 h 开始Fas有少量表达, 至8 h和12 h表达均明显增多, 与2 h组比较差异显著(100% vs 20%, P<0.01), 与4 h组比较差异也比较显著(100% vs 40%, P<0.05). 模型组2 h Bcl-2有较多表达, 4 h表达最多, 4 h与2 h比较差异显著(90% vs 60%, P<0.05), 与8, 12 h比较差异非常显著(90% vs 20%, 均P<0.01 ). 8 h可出现典型的肝细胞凋亡表现. 与模型组各时间点比较, 给予iNOS的抑制剂L-NMMA后血清NO水平及iNOS mRNA的表达均为正常水平, Fas及Bcl-2表达均无显著差异(P>0.05), 阻断后8 h亦可见典型的肝细胞凋亡表现, 阻断NO可使病变较模型组更为严重.
结论: 在FHF中, Fas及Bcl-2的表达均增加, Fas的表达与肝细胞凋亡相一致, 而Bcl-2的表达与肝细胞凋亡呈负相关. 单纯应用NO拮抗剂对肝细胞凋亡及肝损伤无保护作用.