基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-01-15; 13(2): 202-206
Published online 2005-01-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i2.202
适于膜片钳技术的大鼠肝Kupffer细胞急性分离和鉴定
刘亮, 张宗明, 张驰, 姜楠
刘亮, 张驰, 姜楠, 同济大学附属同济医院普外一科 上海市 200065
张宗明, 清华大学第一附属医院普外科 北京市 100016
刘亮, 男, 1975-12-27生, 云南昆明人, 汉族, 同济大学附属同济医院普外一科2002级硕士研究生, 主要从事细胞离子通道与肝胆外科疾病的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30270532; 教育部"跨世纪优秀人才培养计划"基金资助项目, 教技函[2002]48号; 上海市教委"曙光计划"基金资助项目, No. 02SG20.
通讯作者: 张宗明, 100016, 北京市朝阳区酒仙桥一街坊6号, 清华大学第一附属医院普外科. zhangzongming@yahoo.com
电话: 010-64372362 传真: 010-64361322
收稿日期: 2004-11-01
修回日期: 2004-11-07
接受日期: 2004-11-12
在线出版日期: 2005-01-15
Abstract

目的: 建立一种适于膜片钳技术(PCT)的大鼠肝Kupffer细胞的急性分离方法.

方法: 经门静脉插管, 用无Ca2+, Mg2+ K-H原位灌注液冲洗后, Ⅳ型胶原酶原位循环灌注消化, Percoll不连续密度梯度离心, 分离制备大鼠肝Kupffer细胞, 选择性贴壁纯化. 用体内、体外吞噬功能(炭素墨水或聚苯乙烯乳珠)实验鉴定制备的肝Kupffer细胞. 用全细胞膜片钳记录技术测定Kupffer细胞电流.

结果: 分离获得的大鼠肝Kupffer细胞形态多样, 典型的为多角形或星形, 细胞分离产量为2.5-3.5×106/g, 细胞纯度90%, 贴壁率为39.4%. 用台盼蓝染色鉴定, 细胞活性大于90%, 多数细胞明显吞噬颗粒. 易用于PCT, 且记录到钙池操纵的Ca2+ 通道电流(store-operated Ca2+ channel currents, Isoc).

结论: 用胶原酶原位循环灌注消化, 结合Percoll不连续密度梯度离心和选择性贴壁纯化, 成功分离制备出高产、纯度高的适于PCT的肝Kupffer细胞.

Keywords: Kupffer细胞; 膜片钳技术